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背景：社区获得性肺炎(community-acquiredpneumonia，CAP)是发展中国家儿童最常见的感染性疾病。抗生素问世使细菌感染得到有效治疗，但CAP的发病率与死亡率在我国仍处于较高水平。国内外研究证实，肺炎链球菌和b型流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzaetypeb，Hib)是小儿CAP常见的细菌性病原，但其在我国小儿肺炎病原学中的地位，特别是在重症肺炎中的致病地位尚不清楚，阻碍了治疗措施的选择和疫苗的使用。目前，在肺炎病原检测方面，大多数国家采取咽分泌物培养、血培养、血清学等检测方法，其中某些方法并不能反映肺炎病原学的真实情况。分子生物学方法广泛应用于肺炎的病原学检测，但其价值也与标本来源有关。虽然我院住院肺炎患儿的病死率逐年下降，其确切死因并不十分清楚，两种主要致病菌(Hib和肺炎链球菌)所占的地位更不明确。
目的：了解肺炎链球菌、Hib在CAP死亡患儿肺组织中存在与否、分布情况及所占比例，推测细菌性病原在重症儿童CAP病原谱中的地位，为二种细菌疫苗的引进和使用价值的评估提供依据。建立小鼠Hib、肺炎链球菌肺炎模型的方法，为验证方法学和进一步研究打下基础；探讨ISPCR等分子生物学方法在石蜡包埋肺组织标本中检测肺炎链球菌和Hib的使用价值。
方法和材料：一、动物试验：用肺炎链球菌悬浮液(5.1×107cfu/ml)、Hib悬浮液(109cfu/ml)分别感染(滴鼻法)C57/BL、ICR小鼠。每种动物模型均分为实验A组(n=20)、实验B组(n=10)和对照A组(n=6)、对照B组(n=6)。
每种动物模型中，实验A组(n=20)于感染后连续观察7天，记录小鼠生存状态改变、死亡数；实验B组(n=10)感染后同样观察，并于濒死前取血行白细胞计数及分类；两组均取小鼠肺组织行细菌培养、病理检查，并用多重PCR、DNA印迹和ISPCR三种方法分别检测小鼠石蜡包埋肺组织标本中的肺炎链球菌和Hib。对照A组(n=6)以滴鼻法分别滴入相同浓度的同株肺炎链球菌、Hib死菌液；对照B组(n=6)空白对照组，不滴鼻。对照组小鼠处理方法均同实验组。
二、CAP死亡患儿石蜡包埋肺组织中肺炎链球菌及Hib的检测：用多重PCR、DNA印迹和ISPCR三种方法分别检测202例石蜡包埋肺组织标本(死于肺炎的儿童尸检标本，1953年-2002年)中的肺炎链球菌和Hib；另取40例年龄匹配、死于其他非感染性疾病患儿的石蜡包埋肺组织标本作为对照组。结合临床资料分析这两种细菌性肺炎的临床特点、实验室检查特点及病理学特点。
结果：一、动物试验结果：1、两种动物模型，实验A组小鼠多在三天内死亡，总死亡率：肺炎链球菌100％(20/20)，Hib15％(3/20)。
2、两种模型的小鼠肺组织均有不同程度的支气管肺炎改变，以中重度肺炎为主：其中肺炎链球菌占93.3％(28/30)，Hib占80％(24/30)。
3、两种模型中，实验A/B组小鼠肺脏均呈暗红色，无光泽，可见数量不等的出血点、瘀斑；对照A/B组小鼠肺脏为粉白色，有光泽，其上淡红色纹理清晰可见，无出血。
4、两种模型中，实验A/B组小鼠肺组织细菌培养均分别有肺炎链球菌、Hib生长，而对照A/B组无任何细菌生长。
5、三种分子生物学方法对比分析两种模型中，实验A/B组：(1)多重PCR法：肺炎链球菌检出率26.67％(8/30)，Hib检出率为13.3％(4/30)。(2)DNA印迹、ISPCR法：肺炎链球菌、Hib检出率均为100％(30/30)；
对照A/B组：三种方法无一例阳性。二、CAP死亡患儿石蜡包埋肺组织中肺炎链球菌及Hib的检测：1.DNA印迹检测结果：1-1.肺炎链球菌：实验组检出率52.97％(107/202)，对照组检出率30％(12/40)(x2=7.049，P＜0.01)；50-60年代检出率56.03％(65/116)，80年代至2002年检出率48.84％(42/86)(x2=1.470，P＞0.05)。1-2.Hib：实验组检出率13.86％(28/202)，对照组无1例阳性；50-60年代检出率14.66％(17/116)，80年代至2002年检出率12.79％(11/86)(x2=0.084，P＞0.05)。
2.ISPCR检测结果：2-1.肺炎链球菌：实验组检出率52.48％(106/202)，对照组检出率32.50％(13/40)(x2=5.330，P＜0.05)；50-60年代检出率55.17％(64/116)，80年代至2002年检出率48.84％(42/86)(x2=1.470，P＞0.05)。
2-2.Hib：实验组检出率17.82％(36/202)，对照组无1例阳性；50-60年代检出率15.52％(18/116)，80年代至2002年检出率20.93％(18/86)(x2=0.665，P＞0.05)。
结论：1、采用滴鼻法可直接有效感染小鼠肺部。我们建立的小鼠肺炎模型模拟肺炎链球菌、Hib自然侵入途径，简便、经济、易行，具有肺炎典型的病理改变和较好的重复性。
2、DNA印迹、ISPCR法可用于检测肺炎石蜡包埋肺组织标本中的病原，特异强，较传统PCR法更灵敏；ISPCR还具有可定位的特点。
3、在因肺炎而死亡的患儿肺组织中常可找到肺炎链球菌、Hib存在的依据，证明它们是儿童CAP的重要细菌性病原，常引起重症肺炎并导致患儿死亡。