人新蛋白Q9BRX8及BolA家族蛋白性质与功能研究

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随着对多种重要生物的大规模基因组测序工作的完成,基因工程领域又迎来了一个新的时代——功能基因组时代。它的任务就是对基因组中包含的全部基因的功能加以认识。 本实验克隆和研究了人的新型蛋白Q9BRX8的性质,并对其功能进行了初步的探索。Q9BRX8(Chromosome10openreadingframe58,C10orf58)基因的cDNA全长为1690bp,染色体定位于10q22.3。Q9BRX8基因编码的蛋白有229个氨基酸,不含有明显的结构域,预测其分子量约25.7KD,等电点为8.92。酵母双杂交显示RX8与CAML(Calcium-signalmodulatingcyclophilinligand)有相互作用,提示RX8在功能上可能与CAML有关。我们通过GST-Pulldown和蛋白在细胞内的共定位研究进一步验证了RX8与CAML的相互作用。RNA干扰RX8表达后ERK磷酸化程度增加,而ERK总蛋白量不变化,同时检测RNAi后P21与P53的量未发生变化,RNAi后细胞周期和增殖情况都没有发生明显变化。 本实验同时对人BolA家族的三个蛋白hBolAl、hBolA2、hBolA3以及小鼠的BolA家族蛋白mBolAl的分泌性以及它们的分泌途径进行了探索。Westernblot表明这四个蛋白都能分泌到细胞培养上清中,都是分泌蛋白。亚细胞定位显示这四个蛋白与Golgi不共定位,说明它们的分泌不通过高尔基体,为非经典分泌途径的分泌蛋白,现阶段有实验验证的非经典分泌途径的分泌蛋白只有少数几种。
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