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核桃,也叫胡桃或者羌桃,为核桃属植物,与榛子、腰果、杏仁并称为世界四大干果,且位列四大干果之首,有非常高的营养价值和保健作用。核桃果仁中丰富的油脂和蛋白质使其具有补脑、强健记忆和降低胆固醇的功效,故应用最广泛。核桃树及其枝、叶、花、果皮在食品保健品、医药、农业方面均有应用。对核桃资源的综合开发利用已成为发展核桃产业的关键,同时由于核桃价格高,其制品质量一直是困扰消费者及业界的质量检控难题;核桃青皮作为核桃产业的副产品,大量被丢弃,造成资源浪费,需充分发挥核桃青皮的利用价值,使其变废为宝。本研究以核桃蛋白和核桃青皮为研究对象,建立检测核桃乳(露)饮品中掺杂其他植物成分的方法,对核桃青皮提取物进行开发应用研究。研究内容分为以下3部分。1.以核桃仁为主要原材料的核桃乳凭借其良好的保健作用和丰富的营养为广大消费者所喜爱,不法商家借此以次充好如使用花生或者大豆做原材料,严重侵犯了消费者的合法权益。为保证核桃乳(露)饮品质量和保护消费者权益,有必要建立检测核桃乳(露)饮品中掺杂其他植物成分的方法。本研究分别针对大豆特异性过敏源蛋白Gly m Bd28 K基因和花生特异性过敏源蛋白Arah 1基因设计引物,建立了核桃乳(露)中检测花生、大豆成分的PCR方法。结果表明,设计的两对引物特异性良好,花生和大豆成分的最低检测限分别为1%和0.1%。该方法可作为检测核桃乳(露)中掺入大豆、花生成分的有效方法,也可为检测核桃粉、核桃油等其他核桃制品掺假以及食品真伪鉴定相关研究提供一定的参考依据。2.以核桃青皮作为检测对象,使用乙醇浸泡和石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取的方法提取出活性部位。通过生长速率法检测其对4种植物病原真菌的抑制活性,结果表明乙酸乙酯萃取相的抑菌作用最强,一定浓度下对玉米穗腐菌的抑制率可高达90.24%,EC50为7.3538mg/ml;通过管碟法和MIC实验检测了其对7种常见细菌的抑制活性,结果表明乙酸乙酯萃取相抑制效果最好,对金黄色葡萄球菌抑制作用最明显,抑菌圈最高可达22.99mm,MIC和MBC分别为0.781mg/ml和1.563 mg/ml。核桃青皮乙酸乙酯萃取相抑菌调控的试验,考察了培养基和溶液pH、温度、NaCl浓度、蔗糖浓度、紫外照射条件对抑菌作用的影响,发现其对温度和紫外线的耐受力很强,受培养基和溶液pH影响较大,NaCl和蔗糖对菌体生长也有一定影响。通过透射电镜观察其是否对菌体的细胞膜或者细胞壁结构产生影响,研究其对菌体的生长、菌体培养液的电导率和DNA、RNA等溶出物的影响。抑菌机制初步研究结果表明菌体细胞膜、细胞壁及内容物均受到损害,导致生长曲线发生变化、内容物溶出、电导率升高。3.用于抗肿瘤作用检测的核桃青皮提取方法在第2部分的基础上稍作改动,采用MTT方法检测核桃青皮提取物对人肝癌细胞Huh7和人宫颈癌细胞Hela的抑制活性,再用Heochst33342染料对处理后的细胞进行核染色,进一步验证形态学变化,观察细胞凋亡形态。结果表明随着各萃取相浓度的升高,对细胞的抑制作用也变大,其中石油醚萃取相的抗肿瘤效果最明显,其IC50值为45.33mg/ml,可诱导Huh7细胞产生凋亡小体等现象。