论文部分内容阅读
背景:伊曲康唑（ITZ）为新一代三唑类广谱抗真菌药,对念珠菌属、新生隐球菌和曲霉菌属等感染有效,具有很强的亲脂性,难溶于水。目前市售伊曲康唑主要有口服固体制剂（片剂和胶囊）、注射剂,这些制剂在临床使用中均存在比较严重的肝脏毒性,且药物到达眼部的浓度很低,因此需要研究眼局部应用的制剂以提高在靶部位的药物浓度。由生物相容性和可降解性材料组成的固体脂质纳米粒药物递送系统属胶体体系,可以开发用于亲脂性药物的递送,伊曲康唑固体脂质纳米粒在眼部的应用目前未见报道,本文设计的总体思路是利用制剂学技术提高脂溶性伊曲康唑在眼部的生物利用度。目的:本实验的目的是制备伊曲康唑固体脂质纳米粒眼部药物递送系统,并对其进行理化性质及安全性的评价,同时考察其在兔眼中的药代动力学。方法:以丙二醇辛酸酯（Capryol 90）和双硬脂酸甘油酯（Precirol ATO 5）为油相,聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯（Kolliphor@HS 15）、甘油和水为水相,采用微乳法及低温固化法制备伊曲康唑固体脂质纳米粒（ITZ-SLN）,以粒径、包封率、载药量为评价指标,利用星点设计-效应面法筛选最优处方,加入适当浓度的植物凝胶以提高制剂的稳定性,最终优化配方为冷藏条件下无色透明的流动液体。然后建立高效液相（HPLC）分析方法检测体外药物的含量。采用纳米粒度仪（Nano ZS-90）测定纳米粒的粒径、Zeta电位及多分散指数（PDI）进行表征。反高效液相色谱法（RP-HPLC）测定纳米粒中ITZ的包封率。采用扩散法-超滤法测定ITZ-SLN的体外释放行为。眼部刺激性考察以健康无眼疾兔眼为模型动物,采用同体自身对照法,单次给予右眼结膜囊内0.1%ITZ-SLN滴眼制剂100μL,单次给予左眼结膜囊等剂量生理盐水作为对照,分别于给药后1h、2h、4h、24h、48h、72h进行临床及裂隙灯观察,并按照Draize评分原则和标准进行评分,评价此滴眼制剂的眼部刺激性。建立高效液相法在兔眼中药代动力学的测定方法。ITZ-SLN在眼部的药代动力学检测仍以新西兰大耳白兔为实验动物,取健康无眼疾雄性新西兰大白兔42只,将实验用动物随机分组,即实验组和对照组,实验组和对照组根据不同给药时间点各分为7个亚组。实验组兔子双眼各单次给予0.1%ITZ-SLN,对照组分别单次给予50μL 0.1%ITZ-Susp,分别于给药后5min、15min、30min、60min、90min、120min、180min后留取泪液样品,处死动物,并剖取角膜组织和抽取房水样品,采用HPLC-UV法检测样品中ITZ的浓度。另取新西兰大耳白兔42只,与角膜上皮完整时的分组方法分成不同的亚组,直径6.25mm的角膜上皮去除后2h后开始给药,分别于给药后5min、15min、30min、60min、90min、120min、180min后吸取泪液样品,处死动物,抽取房水并剖取角膜组织,采用HPLC-UV法检测样品中ITZ的浓度。数据进行统计学分析,药动学处理采用药动学软件das 2.1和Graphpad prism 8.4处理。结果:ITZ-SLN最佳处方为:药:脂=1:40,脂:表面活性剂=1:4.5,表面活性剂:助表面活性剂=2:1,在0.625-10μg/ml范围内药物峰面积与浓度线性关系良好,日内、日间精密度相对标准差（RSD）均<10%,检测方法可行,粒径仪检测ITZ-SLN的平均粒径为为（15.0±2.1）nm,多分散指数（PDI）为0.135±0.02,Zeta为（-22.65±0.91）m V,药物包封率为（96±2.1）%,载药量为（0.15±0.02）%,其体外释放规律符合一级释放动力学方程。兔眼的刺激性考察实验组与对照组无明显统计学差异（P>0.05）,结果表明ITZ-SLN制剂对兔眼无明显刺激性。药物在泪液、角膜及房水中分离良好,日间与日内的RSD均<10%,回收率均在85%～115%范围内,说明兔眼体内的检测方法可行。其眼部药代动力学考察,在ITZ-SLN与ITZ-SUP分别给药兔眼应用后,在完整角膜组中,实验组角膜中伊曲康唑的药物达峰时间(Tmax)为15min,达峰浓度(Cmax)为（7.92±1.29）μg/g,半衰期(t1/2)为30.66min,对照组角膜中Tmax为5min,Cmax为（3.08±0.99）μg/g,在各个时间点实验组角膜中的药物浓度均显著高于对照组对应时间点浓度（P<0.05）;泪液中实验组与对照组药物Tmax均为5min,Cmax分别为（737.01±93.38）μg/g、（477.64±20.8）μg/g,t1/2分别为20.40min、16.58min,在各个时间点实验组泪液中的药物浓度均显著高于对照组（P<0.05）。在去角膜上皮组中,实验组角膜中Tmax为15min,Cmax为（10.78±1.35）μg/g,t1/2为33.84min,对照组Tmax为5min,Cmax为（5.80±0.88）μg/g,t1/2为26.37min,在各个时间点实验组角膜中的药物浓度均显著高于对照组（P<0.05）;泪液中实验组与对照组Tmax均为5min,Cmax分别为（641.37±30.88）μg/g、（404.18±46.14）μg/g,t1/2分别为21.57min、12.83min,在各个时间点实验组泪液中的药物浓度均显著高于对照组（P<0.05）。角膜上皮完整组与去角膜上皮组中给药后5min及15min实验组角膜中伊曲康唑的浓度明显高于对照组（P<0.05）,其余各对应时间点无显著差异。完整角膜中实验组角膜中药物浓度-时间曲线下面积(AUC（0-180min）)为608.85μg/g·min,对照组角膜中AUC（0-180min）为60.75μg/g·min,实验组是对照组的10.02倍。泪液中AUC（0-180min）为28945.82μg/g·min,泪液对照组中AUC（0-180min）为13792.59μg/g·min,泪液中实验组是对照组的2.10倍。去角膜上皮组中:实验组角膜AUC（0-180min）为724.63μg/g·min,对照组AUC（0-180min）为138.27μg/g·min,实验组是对照组的5.24倍,泪液中实验组AUC（0-180min）为23334.29μg/g·min,对照组AUC（0-180min）为11536.43μg/g·min,实验组是对照组的2.02倍。药物在完整角膜组与去角膜上皮组房水中的浓度均低于检测线以下。结论:ITZ-SLN眼部药物递送系统具有制备方便、粒径小（小于100nm）、无眼部刺激性等特点,可以有效提高药物的生物利用度,作为一个新型的眼部药物递送系统,为眼部抗真菌药的应用提供了新思路。