【摘 要】
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在许多研究中发现经过黄曲霉毒素B1处理之后，体内的IDH3α蛋白的水平会上升，且在肝癌中的IDH3α蛋白水平也会上升。本实验构建了pET28（a）-idh3α重组载体，通过大肠杆菌表达纯化得
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在许多研究中发现经过黄曲霉毒素B1处理之后，体内的IDH3α蛋白的水平会上升，且在肝癌中的IDH3α蛋白水平也会上升。本实验构建了pET28（a）-idh3α重组载体，通过大肠杆菌表达纯化得到IDH3α蛋白，再进行小鼠的免疫得到IDH3α的多克隆抗体，效价为32000。黄曲霉在培养一个月后用甲醇提取黄曲霉毒素B1。将所得到的浓度为约为0.5mg/mL的毒素按照0.25mg/kg的剂量对大鼠的进行每周两次的腹腔注射，为期4个月。明显发现毒素组老鼠的体重上升趋势于其他两组相比较慢；用摘眼球取血的方法将大鼠的血清送到医院进行肝功各项指标的测定，发现其中毒素处理组的谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、总胆红素有显著的增加，而直接胆红素和总蛋白等没有发生变化；用处理后大鼠的肝脏做组织切片首先观察肝脏细胞的变化情况，随后做IDH3α的免疫组化，观察IDH3α在各组中的表达情况，发现在用黄曲霉毒素处理组中的阳性染色面积率较其他两组要高且效果显著；同时用不同浓度的黄曲霉毒素B1处理细胞，发现细胞内IDH3α随着毒素浓度的增加而增加，并选取毒素处理的最佳浓度；用pCDNA3.1（-）构建idh3α的过表达载体，和用pSilencer4.1构建4个干扰载体，并将其通过脂质体转染的方法转到哺乳动物细胞中，通过Western Blot的方法进行验证；证实过表达载体成功构建，但是干扰载体效果较差。
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