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目的:探讨梅毒螺旋体(Treponema pallidum, Tp)重组粘附蛋白Tp0155和Tp0483潜在的诱导巨噬细胞(Mφ)产生炎性细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α的能力;探讨Tp0155和Tp0483诱导产生IL-6、IL-1β和TNF-α是否与NF-κB信号转导通路有关。方法:通过Genbank获取所选Tp0155和Tp0483蛋白的基因序列,以Tp Nichols株全基因组DNA为模板,PCR扩增目的片段,将其亚克隆至原核表达载体pET28a(+)中构建重组质粒pET28a(+)/Tp0155和pET28a(+)/Tp0483,经PCR、双酶切、测序鉴定后转化至表达宿主菌E.coli Rosseta中,IPTG诱导蛋白表达。采用SDS-PAGE和Western blot分析和鉴定表达产物;Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,BCA法测定蛋白浓度;Detoxi-Gel?内毒素去除胶去除重组蛋白中的内毒素。用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞转化为Mφ,并用Tp0155和Tp0483重组蛋白刺激Mφ,采用ELISA双抗体夹心法检测Mφ分泌炎性细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α的水平;提取Tp0155和Tp0483处理后的Mφ的总蛋白,Western blot检测Mφ总蛋白中κB抑制蛋白(IκB)的降解情况。用NF-κB特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)预处理Mφ30 min,再以Tp0155和Tp0483重组蛋白刺激Mφ,分析其对IL-6、IL-1β和TNF-α产生的影响。结果: PCR成功扩增Tp0155和Tp0483出基因目的片段,重组质粒经酶切和测序鉴定证实与Genbank上登录序列完全一致;在IPTG诱导下,重组表达菌分别表达了一相对分子量约为46kDa(Tp0155)和47kDa(Tp0483)的重组蛋白,目的蛋白在菌体细胞内以可溶性和包涵体形式存在,包涵体蛋白为主要存在形式,经Ni-NTA亲和纯化后,纯度在95%以上;内毒素去除胶处理重组蛋白后,鲎实验检测内毒素含量小于0.04EU/mL;0.5～5μg/mL Tp0155和0.5～7μg/mL Tp0483重组蛋白均能通过剂量依赖方式诱导PMA转化后的Mφ产生IL-6、IL-1β和TNF-α炎症因子的产量都随着蛋白浓度的增加而增加,到达某个最高值后逐步减少。Tp0155的浓度在5μg/mL时,TNF-α的量达到高峰,为(963.85±29.66) pg/mL, Tp0155的浓度在7μg/mL时,IL-1β和IL-6的量达到高峰;Tp0483的浓度在5μg/mL时,TNF-α、IL-1β和IL-6的量同时达到高峰。且分泌水平呈一定的时间依赖性:炎症因子的产量随着时间延长而增加,分别在不同时间达到最高值,TNF-α在刺激24h后达到高峰,而IL-6和IL-1β为48h后达到高峰。Western blot结果显示,Tp0155和Tp0483均能诱导Mφ内IκB降解;经PDTC处理后,Tp0155和Tp0483分别能使Mφ的IL-6产生量降至53%和49%;IL-1β产生量降至52%和54%,TNF-α产量分别降至57%和58%。结论:1. Tp0155和Tp0483重组蛋白能通过时间和剂量依赖方式诱导Mφ产生IL-6、IL-1β和TNF-α。2. Tp0155和Tp0483重组蛋白刺激Mφ后能诱导其细胞内IκB降解。3. Tp0155和Tp0483重组蛋白刺激Mφ产生IL-6、IL-1β和TNF-α可能与NF-κB的激活有关。