【摘 要】
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目的:检测人工构建的靶向性锤头状核酶是否具有切割功能.方法:将所设计的靶向性锤头状核酶真核表达载体转染入宫颈癌Hela细胞,用免疫印迹和荧光报告基因方法检测核酶对于内源
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目的:检测人工构建的靶向性锤头状核酶是否具有切割功能.方法:将所设计的靶向性锤头状核酶真核表达载体转染入宫颈癌Hela细胞,用免疫印迹和荧光报告基因方法检测核酶对于内源性HIF-1α的切割功能.应用RT-PCR、WESTERN和免疫组化方法检测靶向于HIF-1α核酶在构建的荷瘤裸鼠模型体内的切割功能,并对肿瘤内血管密度及肿瘤体积进行统计分析.结果 用免疫印迹和荧光报告基因方法检测,结果:为核酶对于内源性HIF-1α具有切割功能,发现随着核酶剂量的递增,Hela细胞内HIF-1α蛋白表达水平明显下降,用RT-PCR和WESTERN方法检测靶向于HIF-1α的核酶在动物体内的功能,结果可见转染核酶后的肿瘤组织与转染PBS的肿瘤组织相比,其HIF-1α、VEGF的mRNA水平明显减少.经组化染色可见核酶处理过的肿瘤组织血管内皮细胞减少,血管密度降低.经核酶处理过的肿瘤较经PBS处理过的肿瘤体积小,通过统计学分析结果具有统计学意义.结论:所设计的靶向性低氧诱导因子-1α(HIF-1α)锤头状核酶具有切割肿瘤细胞内HIF-1α的功能,减少HIF-1α和VEGF的表达,具有抑制血管形成和肿瘤生长的作用.
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