论文部分内容阅读
目的:临床部分:筛选长春地区老年人中认知障碍患者,记录其一般资料、疾病史、相关检查结果,测评痴呆证候要素,观察认知障碍患者证候要素的分布情况,筛选主要证候要素并分析其自身之间以及与认知障碍危险因素、量表评分的相关性。实验部分:通过Morris水迷宫、组织切片、肠道菌群检测、Western-blot、免疫组化、酶联免疫吸附测定等方法,检测分析解毒益智方对阿尔兹海默（Alzheimer’s disease,AD）大鼠的认知功能、海马病理、肠道菌群、细胞焦亡通路相关蛋白、Aβ1-42表达及全身炎症水平的影响,探讨解毒益智方改善AD大鼠认知障碍的机制,为AD提供替代疗法。方法:临床部分:制定长春市老年群体认知障碍证素分布横断面调查表,内容包括一般资料,慢性疾病史、抑郁自评量表、痴呆证候要素量表、简易精神状态检查量表、蒙特利尔认知评估量表,握力强度测定表、日常生活能力量表、相关检查记录。对研究人员进行相关量表计分、中医四诊信息评定一致化培训,采集长春中医药大学两座附属医院部分科室60-75岁患者的信息并进行分组统计。实验部分:1.用Aβ25-35注射SD大鼠两侧海马建立AD模型,造模后分为模型组、盐酸多奈哌齐组、解毒益智方高、中、低剂量组,并取同批大鼠作为空白组。之后分别以生理盐水、盐酸多奈哌齐混悬液、高、中、低剂量解毒益智方、生理盐水灌胃8周。2.灌胃结束后,使用Morris水迷宫检测AD大鼠学习和记忆功能能力,评价解毒益智方药效。3.对大鼠海马组织及肝脏组织进行HE染色,分析解毒益智方对AD大鼠海马病理组织的影响,观察解毒益智方是否存在肝脏毒性。4.16S肠道菌群测序,评估解毒益智方对AD大鼠多肠道菌群结构及多样性的影响。5.应用Western-blot法、IHC法检测AD大鼠海马组织细胞焦亡经典NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路和非经典LPS/Capase-11/GSDMD通路上相关蛋白表达水平及Aβ沉积情况。6.酶联免疫吸附测定法测AD大鼠海马、大脑皮质、结肠、血清中Aβ1-42、IL-1β、IL-18表达水平,评估解毒益智方对AD大鼠中Aβ1-42含量及全身炎症水平的调节作用。结果:临床部分:认知障碍患者（包括轻度认知障碍及痴呆）的主要证候要素是肾虚、脾虚、髓减、痰浊、血瘀。主要证候要素中肾虚与高血压,痰浊与糖尿病及脑卒中密切相关。五个主要证候要素之间存在相互联系,并与MMSE、Mo CA评分呈显著负相关,肾虚、髓减、痰浊、血瘀证候要素评分的升高与MMSE、Mo CA评分的降低存在因果关系。研究结果支持“髓虚毒损”是认知障碍患者关机病机、“脾肾两虚、痰浊蒙窍证”是认知障碍患者主要证候的理论。实验部分:1.Morris水迷宫:与空白组比较,AD模型组大鼠的逃避潜伏期明显延长,穿越平台次数、平台象限游泳时间及距离减少,解毒益智方高、中、低剂量灌胃缩短了AD大鼠的逃避潜伏期,增加了穿越平台次数、平台象限游泳时间及距离（P＜0.05）。2.海马组织及肝脏HE染色:空白组大鼠海马CA1区神经元细胞紧密排列,层数清晰可数,结构正常完整,胞浆丰富,细胞核圆,染色正常。模型组可见神经元细胞错乱排列,层数不清且数量明显减少,形态改变,胞浆与胞核界限不清晰,细胞核固缩,染色加深。解毒益智方对海马CA1区细胞数量、形态结构有大幅度的恢复,以低剂量组效果最为明显。肝脏切片发现,解毒益智方未造成大鼠肝脏结构的明显变化。3.肠道菌群测序结果:相比空白组,AD大鼠肠道菌群多样性未见明显改变,但物种结构发生明显变化,模型组在门、纲、目、科、属、种六个生物分类等级上皆出现致病菌丰度升高、益生菌丰度降低的现象,如厌氧螺旋菌属丰度提升,乳酸菌属丰度降低等,而解毒益智方高、中、低剂量组,尤其是低剂量组抑制了致病菌,提升了益生菌丰度,如提升了约氏乳杆菌、罗伊氏乳杆菌的丰度。4.Western-blot结果:AD大鼠海马组织中NLRP3、caspase-1和capase-11的前体及剪切体、GSDMD的表达水平较空白组显著升高,解毒益智方灌胃降低了焦亡相关蛋白的表达,以低剂量组最为明显（p＜0.05）。5.免疫组化结果:相比模型组,解毒益智方降低了AD大鼠海马Aβ沉积水平、NLRP3、GSDMD阳性细胞数量,以低剂量组最为明显（p＜0.05）。6.酶联免疫吸附测定结果:相比模型组,解毒益智方降低了AD大鼠海马、大脑皮质、结肠、血清中Aβ1-42、IL-1β、IL-18表达水平,其中低剂量组下降最为明显（p＜0.05）。结论:1.长春市轻度认知障碍及痴呆患者的主要证候要素为肾虚、脾虚、髓减、痰浊、血瘀。“髓虚毒损”作为认知障碍患者的关键病机,脾肾两虚、痰浊蒙窍证作为认知障碍患者的主要证候具有普适性。2.解毒益智方可通过增加AD大鼠海马神经元细胞、修复海马组织病理结构、改善AD大鼠肠道菌群紊乱、减少β淀粉样蛋白沉积、下调海马组织内细胞焦亡相关蛋白表达水平,抑制神经炎症及全身炎症反应,改善AD大鼠的认知功能障碍。