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陈皮为我国一种传统中药,由柑橘果皮陈化得到,具有祛痰、镇咳、平喘、调节胆囊和肠胃功能等药理作用。本研究以柑橘果皮和陈皮为实验材料,建立了高效液相色谱同时分析检测九种多甲氧基黄酮(polymethoxyflavonoids,PMFs)的方法,并分析检测了14种不同产地不同品种柑橘果皮和陈皮中PMFs含量的差异;运用超临界流体提取技术对浙江陈皮中3个主要的多甲氧基黄酮进行提取。然后,运用高速逆流色谱分离纯化得到川陈皮素、3,5,6,7,8,3,4-七甲氧基黄酮和桔皮素单品并探究其抗银屑病活性作用。主要研究内容如下:
(1)以乙醇作为提取溶剂,用超声进行提取、高效液相色谱快速准确检测多甲氧基黄酮的方法对14种柑橘皮、陈皮中特征的九种多甲氧基黄酮含量进行比较分析。结果显示九种多甲氧基黄酮,在对照品溶液浓度范围内具有良好的线性关系,且准确度和精确度良好。对测得到的数据进行分析发现,不同品种来源橘柑皮中多甲氧基黄酮种类和含量差异很大。除金钱橘未检出多甲氧基黄酮外,江西陈皮、重庆柑橘、广西皇帝柑、广西砂糖桔干皮中总黄酮含量很高,都在998μg/g以上,其中广西沙糖桔干皮多甲基黄酮总含量高达10412μg/g。
(2)选用浙江陈皮作为原料,用超临界CO2流体对其中的3个多甲氧基黄酮进行萃取,并对最佳萃取工艺条件进行了探讨,通过单因素试验和响应面设计优化了提取工艺,确定了陈皮中多甲氧基黄酮最佳提取工艺为:压力28Mpa、温度55℃、时间67min。在此优化条件下,从陈皮中提取三种主要多甲氧基黄酮总得率为1.89mg/g。根据探索得到的超临界最佳提取条件,进行大批量的提取,从2000g陈皮中提取得到19.66g的粗提物Ⅰ,其中总黄酮的含量为19.15%,然后用石油醚和二氯甲烷萃取后得粗提物Ⅱ,再用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(5.5∶4.5∶5.5∶4.5,V/V)组成的两相溶剂体系,运用高速逆流色谱连续进样成功地分离纯化得到3个多甲氧基黄酮单品。
(3)银屑病是一种常见、难以治疗皮肤病,其特征是以角质的过度增生,炎症细胞浸润和新生血管,形成组织病理改变的慢性炎症性皮肤病。建立银屑病样小鼠动物模型,用川陈皮素、3,5,6,7,8,3,4-七甲氧基黄酮和桔皮素进行抗炎活性测试,通过HE染色在BH2光学显微镜下观察对银屑病样小鼠耳廓组织病理的改变,使用ELISA法检测小鼠血清中炎症细胞因子(IFN-γ、IL-10、IL-2、IL-12、IL-1β和TNF-α)的水平,研究发现川陈皮素、3,5,6,7,8,3,4-七甲氧基黄酮和桔皮素有着很好的银屑病作用。
(1)以乙醇作为提取溶剂,用超声进行提取、高效液相色谱快速准确检测多甲氧基黄酮的方法对14种柑橘皮、陈皮中特征的九种多甲氧基黄酮含量进行比较分析。结果显示九种多甲氧基黄酮,在对照品溶液浓度范围内具有良好的线性关系,且准确度和精确度良好。对测得到的数据进行分析发现,不同品种来源橘柑皮中多甲氧基黄酮种类和含量差异很大。除金钱橘未检出多甲氧基黄酮外,江西陈皮、重庆柑橘、广西皇帝柑、广西砂糖桔干皮中总黄酮含量很高,都在998μg/g以上,其中广西沙糖桔干皮多甲基黄酮总含量高达10412μg/g。
(2)选用浙江陈皮作为原料,用超临界CO2流体对其中的3个多甲氧基黄酮进行萃取,并对最佳萃取工艺条件进行了探讨,通过单因素试验和响应面设计优化了提取工艺,确定了陈皮中多甲氧基黄酮最佳提取工艺为:压力28Mpa、温度55℃、时间67min。在此优化条件下,从陈皮中提取三种主要多甲氧基黄酮总得率为1.89mg/g。根据探索得到的超临界最佳提取条件,进行大批量的提取,从2000g陈皮中提取得到19.66g的粗提物Ⅰ,其中总黄酮的含量为19.15%,然后用石油醚和二氯甲烷萃取后得粗提物Ⅱ,再用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(5.5∶4.5∶5.5∶4.5,V/V)组成的两相溶剂体系,运用高速逆流色谱连续进样成功地分离纯化得到3个多甲氧基黄酮单品。
(3)银屑病是一种常见、难以治疗皮肤病,其特征是以角质的过度增生,炎症细胞浸润和新生血管,形成组织病理改变的慢性炎症性皮肤病。建立银屑病样小鼠动物模型,用川陈皮素、3,5,6,7,8,3,4-七甲氧基黄酮和桔皮素进行抗炎活性测试,通过HE染色在BH2光学显微镜下观察对银屑病样小鼠耳廓组织病理的改变,使用ELISA法检测小鼠血清中炎症细胞因子(IFN-γ、IL-10、IL-2、IL-12、IL-1β和TNF-α)的水平,研究发现川陈皮素、3,5,6,7,8,3,4-七甲氧基黄酮和桔皮素有着很好的银屑病作用。