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VC(Vitamin C)是鱼虾生长发育和维持正常生理功能所不可缺少的营养物质，而且还具有提高抗应激能力和抗病力的作用。暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)作为我国新开发的重要经济养殖鱼类，具有广泛的发展前景，但有关其营养需要的研究资料并不全面，关于暗纹东方鲀对VC需要量的研究未见报道。本研究以VC磷酸酯为VC源，运用流式细胞术，单细胞凝胶电泳技术以及蛋白质双向电泳技术等技术从生理生化、抗氧化、免疫及分子水平等方面探讨了不同VC添加水平的饲料对暗纹东方鲀生长、免疫和抗低温胁迫的影响，为获得暗纹东方鲀的商业饲料中VC的适宜添加量提供依据并以期能找到与暗纹东方鲀冷应激相关蛋白，了解暗纹东方鲀对低温胁迫的适应机制和饲料VC对其抵抗低温胁迫的影响，为鱼类的抗寒基础研究提供参考。本论文共分为2个部分，主要结果如下: 1研究饲料中不同VC水平对暗纹东方鲀幼鱼生长、免疫及抗氧化能力的影响。 使用6组不同VC水平（0、50、100、200、400和800 mg/kg）的配合饲料饱食投喂，每组设置3个平行，每个平行20条鱼（初始体重为10.3±0.21 g）。经过8周养殖后，暗纹东方鲀的增重率、饵料系数、肝体比等生长性能出现显著性差异，当饲料中添加50 mg/kg VC时，暗纹东方鲀的增重率最高，饵料系数最低，与A-0组有显著性差异(P＜0.05)，但与其后四个组没有显著性差异(P＞0.05);饵料中添加不同水平的VC对暗纹东方鲀全鱼的粗蛋白、粗脂肪、粗灰分没有显著影响(P＞0.05)，但对肝脏及肌肉中VC累积量有显著性影响(P＜0.05)，随着饲料中VC添加量的提高，肝脏及肌肉中VC含量显著上升，进行曲线拟合得到:当VC添加量分别达到519.17 mg/kg和583.33 mg/kg时，肝脏及肌肉中VC的积累量达到最大值，分别为:104.54μ g/kg和36.34μ g/kg，但高于此添加量时，则肝脏和肌肉中VC不再随添加量的上升而有显著变化。 随着饲料VC水平的上升，暗纹东方鲀血清碱性磷酸酶先升高后降低(P＜0.05)，谷草转氨酶和谷丙转氨酶呈下降趋势（P＜0.05），超氧化物歧化酶水平呈先下降后上升的趋势(P＜0.05)，胆固醇没有显著性差异(P＞0.05)，而血糖含量下降(P＜0.05)，从血清常规指标来看，VC有保护细胞组织及节省超氧化物歧化酶的作用，可能是与它的抗氧化功能有关。 随着饲料VC水平的上升，暗纹东方鲀血液中细胞凋亡率显著下降(P＜0.05)，呼吸爆发显著提高(P＜0.05)，红细胞数目先上升后下降(P＜0.05)，可能是VC的抗氧化作用保护了红细胞的完整性，但过量的VC不但会降低其抗氧化作用，而且其过量的代谢也会对细胞造成不良的影响。 随着饲料VC水平的上升，暗纹东方鲀肝脏的超氧化物歧化酶活性呈递增的趋势(P＜0.05)，而丙二醛含量呈现逐渐降低的趋势（P＜0.05），碱性磷酸酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶呈现先上升后下降的趋势(P＜0.05)，综合上述指标得出:随着饲料中VC添加量的增加，提高了肝脏的抗氧化酶活性同时降低了过氧化物的含量。 综上所述，在暗纹东方鲀饲料中添加50 mg/kg水平的外源VC磷酸酯即可满足鱼体正常生长，当添加量达到583.33 mg/kg时即可维持体内VC的最大储蓄量及各项健康生理指标所需。 2添加不同浓度VC的饲料对暗纹东方鲀低温胁迫后血液免疫指标、血细胞DNA损伤及肝脏蛋白质表达的影响。 本研究利用流式细胞术（Flowcytometry，FCM）检测血细胞凋亡，呼吸爆发和钙离子浓度来研究暗纹东方鲀血液免疫指标与温度、饲料VC水平的关系。结果表明温度和饲料VC水平显著影响暗纹东方鲀的血细胞凋亡率。在本研究中，温度越低，暗纹东方鲀血液中细胞凋亡率就越高(P＜0.05)，而VC浓度越高，细胞凋亡率显著性降低(P＜0.05)，说明VC有利于降低暗纹东方鲀低温应激下的细胞凋亡率。在血细胞呼吸爆发方面，各VC饲料组水平的呼吸爆发都随温度的下降而降低(P＜0.05)，而随VC浓度的提高有升高的趋势(P＜0.05)，可能是VC有助于增强机体的呼吸爆发从而产生更多的活性氧来对抗低温胁迫。在检测血液钙离子浓度方面，发现温度、VC水平对于暗纹东方鲀血液中钙离子的影响不显著（P＞0.05）。 本研究利用单细胞凝胶电泳技术检测温度胁迫下饲料VC水平对血细胞DNA损伤的影响。随着温度的降低，各VC浓度组的DNA损伤率显著性提高(P＜0.05)，而随VC浓度的增加，DNA损伤率有下降的趋势，可能是由于饲料VC水平的增高有利于诱导呼吸爆发产生更多的活性氧来抵抗低温胁迫，从而保护细胞，降低DNA损伤率，但其原理机制还待进一步研究。 为研究同一VC浓度水平下低温胁迫对暗纹东方鲀肝细胞蛋白质表达的影响。选取25℃A-0组和17℃A-0组肝脏蛋白质做双向电泳，得出暗纹东方鲀肝细胞蛋白质大多在pH4-7之间分部，分子量在18-120 kDa之间。电泳图谱经PDQuest软件分析，得到温度胁迫组(17℃)暗纹东方鲀蛋白点347±12个，常温组(25℃)蛋白点323±17个。其中，共有24个蛋白点发生显著性变化(IF＞1.5、RF＜0.6)，选取差异性最大的五个点得到:显著性上调有四个点，显著下调有一个点，做质谱分析后总结得出:在低温胁迫下，机体会通过调节肝脏中一些相应的蛋白质如脂肪代谢与合成蛋白（如:apolipoprotein A-I precursor、fattyacid-binding protein,heart-like），辅酶（glycine N-methyltransferase-like,partial)及细胞骨架类蛋白(keratin， typeⅡ cytoskeletal1)等来对抗低温胁迫带来的损伤，也就是说低温造成了幼鱼代谢、体结构等变化，具体原理还需进一步研究。 为研究同一低温胁迫下，VC浓度对暗纹东方鲀肝细胞蛋白质表达的影响，选取17℃低温胁迫下A-0组和D-200组肝细胞蛋白质做双向电泳，经PDQuest软件分析，得到A-0组暗纹东方鲀蛋白点347±12个，D-200组蛋白点368±10个，其中，共有21个蛋白点发生显著性变化（IF＞1.5、RF＜0.6)，选取差异性最大的九个点得到:显著性上调的点有八个，显著下调的点有一个，做质谱分析后总结得出:在低温胁迫下，VC可调节肝脏中一些相应蛋白质如能量代谢相关蛋白(ATP synthase subunit d、adenosine kinase-like)、细胞骨架类蛋白(keratin，typeⅡ cytoskeletal1）、分子伴侣(protein disulfide-isomerase A4-like)、辅酶(acetyl-coa acetyltransferase, cytosolic-like、imidazolonepropionase-like)及免疫相关类蛋白（complement Clq tumor necrosis factor-related protein4-like）等蛋白质来保护机体，也就是说低温胁迫下饲料VC会造成幼鱼代谢、体结构和免疫功能等变化，具体调节机制还有待进一步研究。