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乙型肝炎病毒(HBV)是一种非致细胞病变的、有被膜的、双链DNA病毒,是急慢性肝炎和肝细胞癌的主要致病因子。现在全世界有超过20亿的人被HBV感染过,其中有3.5亿为慢性携带者,而中国就达1.2亿。尽管导致HBV慢性感染的因素现在还不十分清楚,越来越多的证据表明,细胞介导的免疫(CMI)响应,特别是抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在控制HBV感染的过程中发挥着十分重要的作用。故在乙肝疫苗研究中需要注意所使用的疫苗能否有效地激起机体的CTL反应,以何种途径激起CTL反应,是否能够在体外有效地评价此种CTL反应。经过基因工程改造脱毒的炭疽杆菌致死因子片断(LFn)是一种理想的抗原投递工具,能够安全有效地将与之融合的抗原带入到抗原呈递细胞(APC)的细胞质中。已经证明,与LFn融合的HIV抗原能通过MHCⅠ类和Ⅱ类途径同时诱导出特异性的CD4+和CD8+T细胞介导的免疫响应。本实验将HBV完整膜抗原以及涵盖全长的20个截短基因片段克隆至表达载体上,并表达纯化这一系列融合蛋白,进行Balb/c小鼠以及中国恒和猴的免疫注射工作,使用IFN-γELISPOT实验检测细胞免疫响应水平,并评价HBV全长膜蛋白的免疫原性以及用表达的小蛋白作为刺激物的可行性。
主要组织抗原(Madior Histocompatibility Complex)MHC分子在所有细胞表面均有表达,并担任抗原肽呈递的重要功能,在免疫系统的特异性识别方面发挥重要作用。中国具有广泛的免疫学动物模型-中国恒河猴资源,其遗传背景尤其MHC-Ⅰ类分子的情况尚不太清楚。本实验使用SSP-PCR(Sequence-Specific Primer-PCR)的方法在约550只中国恒河猴中筛选可能具有呈递HBV全长膜蛋白表位的基因型Mamu-A*11的基因型,并将结果与印度恒河猴中此种基因型出现频率进行比较。
本文主要工作集中在寻找HBV全长膜蛋白中国恒河猴MHC-Ⅰ类分子限制性表位,并同时进行中国恒河猴的MHC-Ⅰ类基因的分型工作,以期建立MHC基因与限制性表位的特异性识别的联系。为乙肝治疗性疫苗的研制提供新思路,并为临床实验奠定基础。