论文部分内容阅读
香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusariumoxysporumf．sp．cubense)引起的一种蕉类毁灭性病害。现在由于4号小种的蔓延，香蕉产业面临新的挑战。对香蕉枯萎病菌4号小种实施检疫控制是防止其扩散的关键。但是，目前对香蕉枯萎病菌4号小种仍采用传统的病菌分离、生物学和致病性鉴定，需时较长。因此，研究探索快速、准确的香蕉枯萎病菌4号小种分子诊断、检测技术，对于防止病害的传播和蔓延，确保我国香蕉安全生产具有重要的理论意义和应用价值。
本研究从90个RAPD随机引物中筛选出11个引物，对采自广东省和广西省发病蕉区的30个香蕉枯萎病菌1号和4号小种代表菌株及番茄枯萎病菌(Foxysporumf．sp．lyscopersici)、西瓜枯萎病菌(F.oxysporumf．sp．niveum)、苦瓜枯萎病菌(F.oxysporumf．sp．momodicae)进行RAPD-PCR扩增，结果产生94个RAPD分子标记，其中多态性的条带有82条。通过聚类分析探讨了供试小种间的亲缘关系，RAPD指纹聚类分析表明，33个供试菌系两两之间的相似系数变幅为0．53～1．00。在遗传相似系数0．67时，可将33个菌系划分为3个RAPD群(RAPDgroups，简称RGs)，即RGI、RGII和RGIII，其中4号小种共15个菌系属于RGI，1号小种共15个菌系属于RGII，而另外三个专化型则属于RGIII。这说明香蕉枯萎病菌及其3个近似专化型与致病性间存在明显的相关性。结果还表明，1号小种内菌株间的遗传分化大于4号小种内菌株间的遗传分化。并且，基于RAPD的菌系多态性与菌系地理来源之间有明显的相关性。
随机引物OPD3和OPRl扩增香蕉枯萎病菌4号小种分别得到一条特异性DNA条带，而在1号小种及近缘菌中，则未扩增出该DNA片段。特异性DNA片段大小分别为1642bp和906bp。根据大小为906bp的特异性DNA片段的序列，设计出一对特定引物RF4-1／RF4-2，用此引物对可扩增出香蕉枯萎病菌4号小种的DNA特异性片段，将RAPD分子标记转化大小为903bp的SCAR标记。通过回检，结果表明，检测特异性、稳定性较好。该方法能够检测到相当于0．1／tg的新鲜菌丝。用所建立的鉴定体系，能从采自广东省番禺、中山、江门和高州的显症香蕉的根茎和未显症的吸芽样品中均检测到香蕉枯萎病菌4号小种。并且，在伤根接种后20天的未显症的巴西蕉苗的根、茎组织中也检测到了4号小种，而在叶片组织中未检测到4号小种。此引物对可用作香蕉枯萎病菌4号小种的特异性SCAR标记。本试验结果为香蕉枯萎病菌分子检测技术体系的建立奠定了基础。