【摘 要】
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目的:以不同蜜源蜂蜜作为研究对象,从抗生素残留、总黄酮及黄酮类组分含量和蜂蜜的抗菌性等几方面入手,探索研究4种方法协同分析不同蜜源蜂蜜质量的可行性。方法:（1）采用快速样品前处理技术（Qu ECh ERS法）处理蜂蜜样本,结合超高效液相色谱串联质谱法（UHPLC-MS/MS法）分析蜂蜜中49种抗生素的残留情况;（2）采用紫外分光光度法（UV法）,以槲皮素为对照建立标准曲线,测定不同蜜源蜂蜜的总黄酮
【基金项目】
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浙江省食品药品监督管理局科技计划（2014018）:十种不同蜜源药蜜的特征成分分析； 衢州市科学技术局（2020K47）:UPLC-MS/MS法快速筛查蜂蜜中60余种抗生素的研究与应用；
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目的:以不同蜜源蜂蜜作为研究对象,从抗生素残留、总黄酮及黄酮类组分含量和蜂蜜的抗菌性等几方面入手,探索研究4种方法协同分析不同蜜源蜂蜜质量的可行性。方法:（1）采用快速样品前处理技术（Qu ECh ERS法）处理蜂蜜样本,结合超高效液相色谱串联质谱法（UHPLC-MS/MS法）分析蜂蜜中49种抗生素的残留情况;（2）采用紫外分光光度法（UV法）,以槲皮素为对照建立标准曲线,测定不同蜜源蜂蜜的总黄酮含量;（3）采用D101型大孔吸附树脂柱纯化蜂蜜中的黄酮类化合物,采用UHPLC-MS/MS法多反应监测（MRM）模式,分析不同蜜源蜂蜜中桑黄素、柚皮素等12种黄酮类组分及其含量;（4）选取无抗生素残留的蜂蜜作为样本,采用平皿法和二倍稀释法分析不同蜜源蜂蜜和81%糖溶液在不同质量分数下对6种菌株的抗菌性能,并初步探讨总黄酮及其黄酮类组分含量与蜂蜜抗菌性的相关性。结果:（1）49种抗生素在各自LOQ～200 LOQ(μg·kg-1)的范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数（r）均大于0.99;各化合物的基质效应在11.8%～79.6%（n=6）之间,基质干扰虽较大,降低了仪器的检出限和定量限,但与国标检出限要求相比,基本能满足样本中抗生素限量检查和灵敏度的要求;提取回收率良好,为73.5%～124.7%{除了低浓度红霉素A(11.0μg·kg-1)的回收率为49.1%外};重复性良好,RSD分别为:低浓度1.7%～13.5%,中浓度0.8%～17.0%,高浓度0.6%～12.2%;49种化合物在24 h内均稳定。25批蜂蜜中有7批检出抗生素残留,具体残留抗生素有:沙拉沙星、甲氧苄啶、诺氟沙星、磺胺对甲氧嘧啶、甲氧苄啶、恩诺沙星、氧氟沙星、双氟沙星和氯霉素,其中诺氟沙星和氧氟沙星的检出频率最高;除了样19中检出禁用组分氯霉素和磺胺对甲氧嘧啶外,其余均在限度范围内,符合国家标准,不合格率为4%。（2）UV法测总黄酮时,糖的存在对总黄酮含量具有很大的影响,81%糖溶液的总黄酮含量检测结果为47.99μg·g-1,基质效应为56.1%（n=6）,回收率为84.4%。通过分析不同蜜源蜂蜜的总黄酮含量结果发现:不同蜜源蜂蜜间总黄酮含量相差较大,其中益母草蜂蜜含量最高,其次是党参蜜和枸杞蜜,洋槐蜜整体偏低;同种蜜源蜂蜜间总黄酮含量相近。实验结果表明,可以通过总黄酮含量的检测结果初步判别蜂蜜的掺伪情况,同种蜜源蜂蜜的总黄酮含量有相对固定的区间值,严重低于区间低限时很可能掺假,低于45μg·g-1（含糖量约为75%）甚至更低时很可能是假蜂蜜。（3）桑黄素、杨梅酮、柚皮素、槲皮素、染料木素、木犀草素、山柰酚、芹菜素、生松素、汉黄芩素、白杨素和高良姜素的质量浓度分别在其LOQ～10-250 LOQ范围内与峰面积线性关系良好,相关系数（r）均大于0.99,提取回收率分别为70.6%、59.3%、83.0%、87.8%、83.4%、81.1%、93.3%、89.9%、86.1%、95.9%、89.8%和93.3%,基质效应在94.3%～115.7%（n=5）之间,化合物在24 h稳定性良好。不同蜜源蜂蜜之间黄酮类组分相似,但含量分布有一定程度的差异。如:洋槐蜜中富含白杨素和槲皮素,生松素和木犀草素次之,含少量柚皮素、山柰酚和芹菜素;柑橘蜜富含槲皮素和山柰酚,柚皮素、生松素和白杨素为辅,含少量木犀草素、芹菜素和高良姜素;油菜蜜中富含山柰酚和槲皮素,含少量白杨素、生松素、柚皮素和染料木素。（4）通过不同蜜源蜂蜜对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌和黑曲霉等6种致病菌的抗菌研究发现:（1）不同蜜源蜂蜜对不同菌株的抗菌性具有很大程度的一致性,结果可用于蜂蜜质量评定;（2）大肠埃希菌、白色念珠菌和黑曲霉具有耐高渗透压的特点,可用于区分是否为高浓度糖浆勾兑的假蜂蜜,但是否能有效区分掺假量需进一步试验;（3）金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和乙型副伤寒沙门菌对高渗性敏感,除乙型副伤寒沙门菌能在稀释1倍的情况下通过是否具有杀菌作用来区分真假外,其余不能在稀释1倍的情况下通过查看蜂蜜是否有抑菌作用来直接区分真假,但能通过进一步稀释下的抗菌作用反映不同蜜源蜂蜜间的质量优劣情况;（4）由于蜂蜜的抗菌机制复杂多变以及对不同抗菌因素的敏感性不同,单种菌株的抗菌性试验不一定能达到有效区分蜂蜜质量优劣的目的,需对2个甚至2个以上的菌株抗菌性实验结果进行综合分析;（5）蜂蜜的抗菌性结果可用于区分相同蜜源蜂蜜间的质量差异情况。结论:通过对蜂蜜中49种抗生素残留分析、总黄酮含量测定、不同黄酮类组分的含量测定以及抗菌性研究综合分析发现,此4种方法的结合可以从安全性和有效性方面用于蜂蜜的鉴别、蜜源来源初步鉴定和蜂蜜质量等级评价。在抗生素残留初筛的基础上,通过UHPLC-MS/MS法分析蜂蜜中黄酮类组分及其含量的差异可用于蜜源来源的初步鉴定,同时结合蜂蜜的总黄酮含量测定结果用于蜂蜜质量评价。同种蜜源蜂蜜,其总黄酮及黄酮组分总量相近。因此,可以通过对同种蜜源蜂蜜的总黄酮或黄酮组分含量与抗菌活性的大小判断蜂蜜的真假伪劣情况。
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