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以菠萝品种神湾(Ananas Comosus cv.Shenwan)组培苗的叶基为外植体,在MS基本培养基上,对器官发生途径再生不定芽进行了研究。结果表明:叶基脱分化形成愈伤的适宜培养基为MS+2mg/L NAA+ lmg/LBA,愈伤诱导率为54.44%;叶基脱分化适宜暗处理时间为20d,愈伤诱导率为74.44%;初代培养愈伤类型及分化能力强弱依次为:颗粒球状致密愈伤>不规则致密愈伤>表面疏松愈伤:不定芽分化培养基为MS+2mg/L BA+0.5mg/L NAA,不定芽诱导率和平均不定芽发生量分别为94.67%和3.55个/块。
以菠萝愈伤为材料,在MS液体培养基上,通过调节常用生长调节剂NAA、BA、2,4-D及其他添加物的浓度,建立起体胚的诱导再生体系。结果表明:胚性悬浮培养物适宜培养基为MS+4mg/L 2,4-D+0.5mg/L NAA,胚性愈伤增长量为6.44g,体胚发生量为3.4个/g;2,4-D适宜培养时间为90d,体胚发生量、同步化最好;体胚发生及增殖培养基为MS+3mg/L NAA +0.5mg/L BA,体胚发生量达12个/g;体胚成熟培养基为MS+2mg/L NAA+ 0.5mg/L IBA+500mg/L LH,体胚萌发量为8.8个/g;菠萝体胚发生发育过程包括胚性细胞群、原胚、球形胚、梨形胚、笋形胚和子叶胚(成熟胚)。
以菠萝愈伤为材料,对胚性细胞悬浮系建立的条件进行了摸索。结果表明:胚性愈伤诱导培养基为MS+4mg/L 2,4-D+0.5mg/L BA,胚性愈伤增长量是其他组合的3-5倍;胚性细胞悬浮系建立的适宜培养基为MS+2mg/L NAA+0.5mg/L BA,增殖系数为6-8倍;细胞增殖培养基为MS+2mg/L NAA+0.5mg/L BA,细胞增长量为7.1x104个/mL;胚性细胞适宜的起始接种量为2.5x104个/mL,培养1代后增长量达7.09x104个/mL。
以胚性悬浮培养物、非胚性愈伤、组培苗幼嫩叶片为材料,对原生质体分离因素及培养条件进行了探索。结果表明:叶片原生质体产量最高,非胚性愈伤次之,胚性愈伤最低,分别为2.67x107个/g,5.41 xl06个/g、3.81x105个/g;叶片原生质体分离酶液组合:2%纤维素酶+0.2%果胶酶+0.1%离析酶,12%甘露醇;非胚性愈伤原生质体分离酶液组合:2.0%纤维素酶+0.3%离析酶,13%甘露醇;经活力鉴定,叶片原生质体荧光最亮,非胚性愈伤次之,胚性愈伤最低;叶片原生质体培养方法采用液体浅层静置培养法,适宜培养基配方:改良MS(去除NH4N03)+3%蔗糖+12%甘露醇+1mg/L NAA+0.5mg/L BA+5%椰汁+300mg/L水解酪蛋白+60mg/L甘氨酸+250mg/L谷氨酰胺;原生质体适宜接种密度2xlOs个/mL;3-5d细胞壁再生,随后细胞初次分裂、二次分裂、多次分裂,30d后形成直径150μm、肉眼可见的淡绿色微愈伤组织,细胞分裂率为1.35%,细胞分裂量为2.7x103个/mL。
本研究以菠萝胚性愈伤为材料,以50Gy、100Gy、200Gy, 300Gy四个剂量进行处理,结果表明:60C0γ射线辐射菠萝胚性愈伤的半致死剂量为152.31Gy;60C0γ射线对菠萝胚性愈伤及再生组培苗的辐射效果较好,随辐射剂量增加平均植株增殖量、植株长势、根长势抑制作用明显增强;再生植株出现的主要变异类型包括叶缘皱缩、叶扭曲、叶拧结、新老叶发育不均衡、叶片反转、植株矮化、茎伸长、腋芽分化、嵌合体、叶片缺绿等。