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研究背景: 乳腺癌是女性恶性肿瘤中，发病率最高的肿瘤，每年全世界乳腺癌新增约有120万妇女，其中约有50万妇女死于乳腺癌。随着我国经济的发展，近20年发病率明显上升，已严重影响妇女身心健康甚至危及生命[1]。目前对乳腺癌的治疗方法有手术、放疗、化疗、内分泌治疗、分子靶向治疗、生物免疫治疗与中医药治疗。中医药抗乳腺癌方法治疗一般分为单味中药及复方，单味中药所含成分较多，复方成分更加复杂，抗癌机理很难阐述清楚。本课题根据导师章永红教授多年的临床经验，将抗乳腺癌疗效显著的中药红豆杉、雷公藤和干蟾皮的有效成分组成解毒成分复方，研究其对乳腺癌细胞的抗癌作用及机制，为进一步抗乳腺癌研究及开发利用提供理论和实验依据。 研究目的: 本课题通过实验研究解毒成分复方对乳腺癌细胞的增殖与凋亡的影响，对乳腺癌细胞相关信号通路传导蛋白和相关凋亡蛋白的影响，来探讨其抗乳腺癌的作用及机理，并通过荷瘤裸鼠的体内实验进一步验证其抗肿瘤效应及毒性，为临床中药复方治疗乳腺癌提供理论依据，也为中药复方抗肿瘤机理的实验研究奠定基础。 研究方法: 1、通过MTT比色法抑瘤率的测定说明中药解毒成分复方对人乳腺癌ER(+)MCF-7细胞与ER(-)MAD-MB-231细胞增殖的抑制作用; 2、采用流式细胞仪检测中药解毒成分复方对人乳腺癌ER(+)MCF-7细胞与ER(-)MAD-MB-231细胞周期的影响; 3、采用高内涵细胞分析系统测定解毒成分复方对人乳腺癌ER(+)MCF-7细胞与ER(-)MAD-MB-231细胞的凋亡程度; 4、采用Western blot测定中药解毒成分复方对人乳腺癌ER(+)MCF-7细胞与ER(-)MAD-MB-231细胞相关信号传导蛋白p-ERK、p-JNK、p-P38以及相关凋亡蛋白Bax、Bcl-2、Bad、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9表达的影响; 5、通过观察皮下种植人乳腺癌MCF-7细胞荷瘤裸鼠，测定中药解毒成分复方对裸鼠的体重、瘤体重量和体积、抑瘤率、脾脏重量和脾脏系数的影响。 研究结果: 随着药物浓度的增大和时间的延长，中药解毒成分复方对ER(+)人乳腺癌MCF-7细胞和ER(-)人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制率也增大，呈一定的量效和时效依赖关系;流式细胞仪测定中药解毒成分复方阻滞MCF-7细胞于G2期，MDA-MB-231在G2和S期;高内涵细胞分析测定其对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞以早期凋亡和细胞核凋亡为主;Western Blot提示其能下调p-ERK和Bcl-2蛋白表达，上调p-JNK、p-P38、 Bad和Bax蛋白，促进Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白的活化，以Caspase-8、Caspase-3尤为显著;对皮下种植人乳腺癌MCF-7细胞的荷瘤裸鼠，中药解毒成分复方随着剂量的增高抑瘤率也增大，呈一定的量效依赖关系，但毒性也增大。低剂量的中药解毒成分复方对荷瘤裸鼠的体重影响不大，与模型组无差异性，中剂量中药解毒成分复方对脾脏系数与模型组也无明显差异性。 研究结论: 本课题以红豆杉、干蟾皮、雷公藤有效成分紫杉醇、华蟾酥毒基和雷公藤甲素组成复方为研究对象，观察到中药解毒成分复方在体外对ER(+)人乳腺癌MCF-7细胞和ER(-)人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖有明显的抑制作用;作用于细胞周期的G2和S期，阻滞DNA合成;并能诱导其早期凋亡和细胞核凋亡。中药解毒成分复方诱导人乳腺癌细胞凋亡是多靶点和多机制的，其中对EGFR家族的MAPK三个信号通路均有作用，通过下调ERK蛋白表达、上调JNK和P38蛋白表达来阻断Ras-Raf-MAPK-ERK激酶系统，抑制细胞核内的转录和翻译，从而促细胞凋亡。从下调线粒体内Bcl-2蛋白表达和上调Bad、Bax蛋白提示，其能调控Bcl-2家族起到促蛋白凋亡作用。从上调Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达提示，其对细胞凋亡的两条信号通路都有作用，即外源性死亡受体通路和内源性线粒体通路。通过体内和体外实验提示，中药解毒成分复方有抗乳腺癌作用，随着剂量增加的和时间的延长抑瘤率提高，呈一定的量效和时效依赖关系，但由于有一定的毒副作用，采用中低浓度的中药解毒成分复方不仅可以达到抗乳腺癌作用，而且毒副作用不明显。