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木霉菌是一种具有重要经济价值的丝状真菌,是一类分布广泛的土壤习居菌,被认为是最有希望的生防因子。据统计,在全世界25个国家和美国43个州的生物防治课题中,大约34%是有关木霉的研究,可见木霉菌在生物防治上具有独特优势和研究价值。它的特点是对于生长环境具有广泛的适应性,可利用各种简单或复杂的碳源和氮源,木霉可产生多样的拮抗作用,产生抗生物质和溶菌酶类。目前利用木霉作为植物病害的生防真菌已有很多的报道,但将木霉作为生物农药直接用于生产,菌剂的保质期还存在一定的问题。生物制剂要求有一定的保质期,而影响菌剂保质期的主要因素是菌体类型。木霉制剂有两种类型,一种利用分生孢子另一种利用厚垣孢子。分生孢子产量大,但存活期短,而厚垣孢子存活时间长,保质期长,因此厚垣孢子制剂有其独特的优势。目前对于厚垣孢子的研究多在于孢子的培养条件,对于厚垣孢子形成的分子机制还知之甚少。为了研究这一问题,我们利用RNA指纹技术cDNA-AFLP(cDNA-amplified fragment length polymophism)分析了绿色木霉在特异产厚垣孢子的培养基中产生厚垣孢子和不产生厚垣孢子时基因表达的差异。采用了96对引物组合,分离到48个有差异的cDNA片段。通过Reverse Northern Blot进一步筛选出了五个阳性克隆。Northern Blot结果显示,其中五个片段(TriⅠ、TriⅡ、TriⅢ、TriⅣ、TriⅤ)都呈阳性反应,TriⅠ和TriⅡ在不产生厚垣孢子的时候表达量很少,但在产生厚垣孢子时表达量明显增加。TriⅢ、TriⅣ利TriⅤ在不产生厚垣孢子时没有表达,而在产生厚垣孢子的时候有明显表达,证明这五个片段与产生厚垣孢子有关。为进一步弄清这五条片段的结构,我们对它们进行了克隆和测序分析,TriⅠ与哈氏木霉60S核糖体(P36)基因具有较高的同源性,TriⅡ与玉蜀黍赤霉PH-1的染色体2假定蛋白基因具有较高同源性,TriⅢ的预测产物与碱性HLH转录因子Cph2具有较高同源性,TriⅣ和TriⅤ与已知基因同源性很低,可能代表新基因。