辣椒花药培养及其胚胎发生机理研究

来源 :山西农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:liongliong548
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辣椒(Capsicum annuum L.)是我国种植面积最大的蔬菜作物之一。花药培养是能够缩短育种年限、提高育种效率等问题的有效方法之一。本论文以17个辣椒基因型为供试材料进行花药培养,筛选出胚状体诱导率较高的三个基因型,并以这三个基因型为基础,研究了花药培养胚状体诱导相关的影响因素,并进行了花药培养植株的驯化移栽与倍性鉴定;进而对不同培养时期的花药以及胚状体进行了cDNA-AFLP分析,具体研究结果如下:1.以17个辣椒基因型材料进行花药培养,分别研究了基因型、激素浓度组合、高温热激处理和接种时期四个方面对辣椒花药胚状体诱导率的影响,并对花药产生胚状体的过程进行了观察。结果表明,不同基因型辣椒花药胚状体诱导率差异显著,其中最易产生胚状体的基因型是“海花三号”,诱导率达到28.70%,没有产生胚状体的有8个基因型;添加合适的激素组合可以提高辣椒花药培养效果,0.1mg·L-16-BA+0.5mg·L-1NAA+1.0mg·L-1KT是辣椒花药胚状体诱导培养最适宜的生长调节剂组合;接种后35℃高温热激处理6~10d能够大大提高胚状体诱导率;另外在本试验条件(越冬辣椒栽培)下,2-3月份接种的花药最易出现胚状体。2.以辣椒花药培养得到的植株为供试材料进行研究,分别进行了不同浓度的6-BA和NAA对花药培养植株继代增殖的影响、花药培养植株的驯化移栽程序以及倍性鉴定。结果表明,辣椒植株继代的最佳培养基为MS+1.0mg·L-16-BA+0.1mg·L-1NAA;辣椒花药培养植株移栽前要进行炼苗,时间以2-3d为宜,再生植株的成活率可达90%以上;辣椒植株的单倍体和二倍体气孔保卫细胞叶绿体数差异极显著,单倍体的叶绿体数目为8.78,二倍体的叶绿体数目为17.26。结合根尖压片法发现用气孔保卫细胞叶绿体数目鉴定植株倍性准确率达90%,表明利用气孔保卫细胞叶绿体数目统计法可以快速准确地确定辣椒花药培养植株的倍性。3.为了解辣椒花药培养胚胎发生的分子机制,以“海花三号”为供试材料,利用cDNA-AFLP技术分离与花药胚胎发生的相关特异表达片段,并进行克隆与分析。通过对64对引物组合的筛选,共分离得到113个与花药胚胎发生相关的表达序列标签(EST),对其中21个ESTs进行回收,经克隆测序及BLAST同源性检测发现5个ESTs与马铃薯的酶类以及细胞膜锚定的类泛素折叠蛋白有较高同源性;2个ESTs与番茄的真核翻译起始因子以及特征不明显的mRNA具有同源性;2个ESTs与烟草、番茄的钾离子通道蛋白具有同源性;3个ESTs与辣椒的CaCM328A06、CaCM642F15基因和马铃薯的RH190I20基因有同源性;3个ESTs虽发现同源序列,但它们可能与辣椒花药胚胎发生没有关系;有6个ESTs未发现同源序列,可能代表了新的基因。
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