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目的（1）研究原发性肝癌中RASSF1A基因mRNA表达水平及启动子区甲基化水平，探讨启动子甲基化与mRNA表达的关系。（2）研究原发性肝癌中RASSF1A基因启动子的甲基化水平及甲基化与临床特征的关系。方法（1）收集65例原发性肝癌患者的肿瘤标本及其癌旁组织、10例正常肝组织，应用甲基化特异性PCR测定RASSF1A基因启动子区甲基化状态，分析甲基化与临床特征的关系；采用实时荧光定量PCR方法检测RASSF1A基因mRNA表达水平，分析RASSF1A基因甲基化与mRNA表达的关系。（2）收集100例原发性肝癌患者的肿瘤标本及其对应癌旁组织和6株肝癌细胞株及10例正常肝组织，采用甲基化特异性PCR测定RASSF1A基因甲基化状态,分析甲基化与肝癌临床特征的关系。采用甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理肝癌细胞株,提取细胞株RNA,利用RT-PCR检测肝癌细胞株在甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理前后RASSF1A基因表达的情况。结果（1）65例肝癌组织中有41例(63.08%,41/65)存在RASSF1A基因CpG岛的异常甲基化,癌旁组织中有10例(15.38%,10/65),而正常肝组织中无RASSF1A基因甲基化存在，RASSF1A基因异常甲基化在三种组织中的发生率差别有统计学意义（x~2=38.092, P<0.001）。65例原发性肝癌实时荧光定量PCR分析有38例（58.5%,38/65）肝癌组织中RASSF1A mRNA表达水平对比癌旁组织显著下调，其中76.32%（29/38）伴有启动子区甲基化，即RASSF1A基因mRNA表达下调与其启动子区甲基化有关（x~2=6.884, P<0.01）。（2）100例肝癌组织中有69例(69%,69/100)存在RASSF1A基因CpG岛的异常甲基化,癌旁组织中有15例(15%,15/100),6株肝癌细胞株有4株（66.67%,4/6）发生甲基化,而正常肝组织中无RASSF1A基因甲基化存在，RASSF1A基因异常甲基化在肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织中的发生率差别有统计学意义（x~2=67.75, P<0.001）。RASSF1A基因启动子甲基化与患者乙肝表面抗原（x~2=11.341, P=0.001）及组织分化（x~2=10.575, P=0.005）存在一定相关性。发生甲基化的4株肝癌细胞株经甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理后,经RT-PCR证实，RASSF1A基因均重新恢复表达。结论（1）在肝癌中RASSF1A基因mRNA表达下调，该基因mRNA表达下调与其启动子区甲基化有关，RASSF1A基因缺失或低表达可能在肝癌发生、发展过程中起着重要作用。（2）原发性肝癌存在RASSF1A基因CpG岛异常甲基化,并与患者乙肝表面抗原及组织分化密切相关。经甲基化抑制剂处理的肝癌细胞株又重新恢复表达，进一步推测CpG岛的甲基化可能是导致其基因表达降低的主要原因之一，RASSF1A基因启动子区甲基化可能在肝细胞癌发生、发展过程中起一定作用。检测RASSF1A基因启动子异常甲基化有可能成为肝癌诊疗的一种新方法。