【摘 要】
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背景:细菌生物膜(Biofilm,BF)是细菌粘附于物体表面,并分泌大量多糖、蛋白和DNA等多聚物质,将自身包裹于其中而形成的复杂膜状结构.生物膜是细菌的一种保护性生长模式,广泛存
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背景:细菌生物膜(Biofilm,BF)是细菌粘附于物体表面,并分泌大量多糖、蛋白和DNA等多聚物质,将自身包裹于其中而形成的复杂膜状结构.生物膜是细菌的一种保护性生长模式,广泛存在于自然界.细菌也可定植于植入物、留置导管或人体组织表面形成生物膜.生物膜内的细菌生物学特性与普通浮游细菌有显著差异,它具有极强的对外界化学物质的耐受性和抵抗宿主免疫系统的能力,是临床上难治性感染的一个重要原因.近年来随着医学的发展,各种人工器官和留置导管使用的日益增多,生物膜相关感染也在不断增加,因此,研究生物膜形成影响因素及机理对于生物膜相关感染的防治具有重要意义.第一部分 铜绿假单胞菌生物膜分子方法的研究 目的:筛选一种有效且简单易行的生物膜分析方法 方法:分别采用流动培养法和静止培养法建立生物膜模型,用4种不同的方法分析:共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)法、扫描电镜法、结晶紫染色法和超声振荡—活菌计数法分析生物膜的形成情况,CLSM观察生物膜的形态结构和厚度,扫描电镜法观察生物膜的形态结构,结晶紫染色法检测吸光度值,超声振荡—活菌计数法计数生物膜内的活细菌数.分别将扫描电镜法、结晶紫染色法、超声振荡—活菌计数法所反映生物膜形成情况与CLSM结果相比较.第二部分 铜绿假单胞菌生物膜形成影响因素的研究 目的:研究不同条件下铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)生物膜形成的差别.方法:采用恒化器结合改良Robbins装置培养铜绿假单胞菌生物膜,用超声振荡—活菌计数法检测不同培养时间(8h、24h、72h)、不同温度(23℃、37℃)、不同粘附材料(玻璃、硅胶)、不同液体流速(30ml/h、90ml/h)和不同培养基(M63、MH、LB)生物膜内活细菌数.第三部分 铜绿假单胞菌生物膜形成相关基因的研究 目的:检测铜绿假单胞菌生物膜形成过程中相关基因的转录,探讨生物膜形成的分子机制.方法:培养24h和96h铜绿假单胞菌生物膜和相应对数期浮游菌,提取这些细菌的总RNA,进行反转录,运用半定量PCR技术扩增fliM、lasB和algU基因,并以16SrRNA作为内参照基因,分别比较浮游菌、24h生物膜和96h生物膜的fliM、lasB和algU基因的光密度值.
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