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我们克隆得到了人类多巴胺受体D5基因的一个新亚型D5B。D5B基因的序列与D5有98％同源性，与D5的两个假基因有94％同源性。D5B基因与假基因不同，含有一个完整的开放阅读框，能够编码比D5受体多一个氨基酸的蛋白。药理学研究初步表明D5B受体与D5受体的药理学特性不同。为了研究D5B受体的功能，我们建立了由CamKⅡ启动子驱动的前脑过表达D5B的转基因大鼠。RT-PCR和Western blot分析表明D5B基因在转基因大鼠脑部特异性表达。随后运用行为学方法对D5B转基因大鼠进行了焦虑、抑郁、学习和记忆方面的表型研究，结果表明D5B基因在许多大脑功能如情绪、学习和记忆方面起到复杂的调控作用。 1．D5B基因克隆的确证 在之前的研究中，我们是用Human Genomic DNA做模板，PCR得到的D5B基因。为了验证克隆的可靠性，我们分别以SH-Sy5Y和HEK293两种细胞提取的基因组DNA作模板进行PCR反应，之后将PCR产物克隆到T载体并测序。由测序结果分析，我们从42个测序克隆中得到12个含有D5B基因的克隆。 2．建立转基因大鼠 大鼠作为一种模式动物已经被广泛的应用于药理学研究。国外也有不少关于利用转基因大鼠的报道。考虑到多巴胺受体在大脑功能方面的重要作用，我们利用CaMKⅡ启动子构建了前脑特异表达D5B受体的转基因大鼠。先将D5B基因克隆入含有内含子和SV40 polyA尾巴的p265载体，再将p265—D5B片断克隆入含有CaMKⅡ启动子的p279载体。转基因大鼠通过显微注射获得，并用PCR和Southern blot的方法鉴定转基因阳性。