【摘 要】
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目的： 二甲双胍作为治疗糖尿病的药物，由于其疗效确切，副作用小被广泛用于临床二型糖尿病的治疗。最近许多研究证明，它在降低人类癌症的发病率和复发风险，抑制癌细胞发生发展方
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目的： 二甲双胍作为治疗糖尿病的药物，由于其疗效确切，副作用小被广泛用于临床二型糖尿病的治疗。最近许多研究证明，它在降低人类癌症的发病率和复发风险，抑制癌细胞发生发展方面也起到了作用，在对患有乳腺癌的糖尿病人的辅助化疗和改善预后方面的作用尤为突出，然而其抑制癌症机制尚未明确。MicroRNA在机体内广泛存在，且与多种生物功能相关，已经成为目前癌症研究的热点。有论著表明，miRNA可能参与了二甲双胍的抗癌作用。本研究旨在探索二甲双胍如何影响乳腺癌细胞的生物学功能，通过体内和体外实验检测二甲双胍作用下miR-200c的变化，以及两者之间的相互关系。 方法： 1.首先利用CCK-8实验检测二甲双胍（0-20mM）对MDA-MB-231、T-47-D细胞增殖的影响，确定三个最佳作用浓度（5、10和20mM）。利用克隆形成实验和凋亡实验分别测定经过二甲双胍作用后细胞的增值能力和凋亡情况。通过划痕实验（T-47-D细胞的迁移）、Transwell小室（MDA-MB-231细胞迁移和侵袭）来观察细胞迁移侵袭能力。并且用MDA-MB-231细胞建立乳腺癌模型小鼠，检测二甲双胍对乳腺癌肿瘤的生长影响作用。利用Real-time PCR、免疫组化和western blotting技术分别检测细胞株和瘤组织中miR-200c的表达和蛋白c-Myc、AKT2、Bcl-2、Bax的变化。 2.通过脂质体转染的方法构建miR-200c过表达和低表达的MDA-MB-231细胞株。通过Real-time PCR检测细胞株中miR-200c的表达，确定稳定转染的细胞株。通过CCK-8，克隆形成，细胞凋亡、Transwell小室实验检测转染后细胞株的生物学功能。Western blotting技术检测细胞内蛋白AKT2、Bcl-2、Bax的变化。 结果： 在本课题研究中，主要证明了以下三点：首先，证明了二甲双胍可以抑制乳腺癌MDA-MB-231和T-47-D细胞的增殖、克隆形成以及迁移侵袭的能力，并可以促进这两种细胞的凋亡。还发现二甲双胍可以提高细胞内miR-200c的含量以及抑制c-Myc、AKT2和Bcl-2蛋白的表达。第二，通过构建miR-200c高表和干扰的细胞株，证明了miR-200c对乳腺癌细胞生物学功能的抑制作用，并验证了miR-200c参与二甲双胍的抗癌作用。第三，二甲双胍可以抑制乳腺癌模型SCID小鼠肿瘤的生长，且可以上调肿瘤组织中miR-200c的水平，抑制c-Myc和AKT2蛋白的表达。 结论： 本研究证实了二甲双胍对乳腺癌细胞（MDA-MB-231、T-47-D）增殖，迁移、侵袭的抑制作用，对凋亡的促进作用，还证明了二甲双胍可以抑制乳腺癌模型SCID小鼠肿瘤的生长。并发现二甲双胍可以上调乳腺癌细胞和模型小鼠瘤组织中miR-200c的表达，且miR-200c可以抑制MDA-MB-231细胞的生物学功能，和二甲双胍作用相似。实验表明miR-200c可能参与二甲双胍的抗肿瘤作用，这一发现可能为二甲双胍抗癌作用提供新的依据。
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