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目的:乙型肝炎是威胁人类健康的一种重要疾病,乙肝病毒(HBV)的感染在世界范围内很广泛。目前我国乙型肝炎的发病率居传染病首位,死亡数居传染病第三位,危害很严重。不同个体在感染HBV后临床表现及结局各不相同。近来的研究显示乙肝感染具有遗传易感特征, HBV感染的预后与个体基因的多态性有关。单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)是基因多态性研究的第三代标记,正逐步成为分子诊断、临床检验、新药研发的重要手段。通过检测基因的SNPs发现新的基因突变情况及基因多态性与人类疾病的相关性,能为进一步了解疾病发生发展的分子机理提供依据。因此,系统地研究个体基因的多态性与慢性乙型肝炎的相关性,对于慢性乙型肝炎的预测、预防及治疗将会起到重要作用。TGF-β基因和MMP基因是目前研究的热点。本课题通过检测慢性乙型肝炎患者和正常人群中TGF-β1基因启动子区-509C/T基因多态性和MMP-9启动子区-1562C/T基因多态性的分布频率,分析此两个功能性基因多态性与慢性乙型肝炎的相关性,探讨它们在慢性乙型肝炎发生和发展中所起的作用,以便从更深入的基因水平寻找慢性乙型肝炎的遗传根源,为其预防和治疗提供相应的指导,最大限度地预防这些疾病的发生和发展。方法:按照2000年全国第十次病毒性肝炎及肝病学术会议修订的《病毒性肝炎防治方案》的诊断标准,选取河北省石家庄市传染病医院的慢性乙肝患者75例作为病例组(包括48例慢性肝炎患者和27例肝炎后肝硬化患者)、92名健康体检人员作为正常对照组;取研究对象外周静脉血5ml,用胍盐酸法提取血细胞中的人类基因组DNA,并用紫外分光光度计检测DNA的浓度和纯度。应用等位基因特异扩增方法(ASA)设计两对TGF-β1基因启动子区-509C/T位点的特异引物(分别扩增野生型等位基因和突变型等位基因),模板DNA经PCR扩增后,扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳分离,对个体基因型及等位基因型进行判定。在基因分型时做空白对照进行PCR质量控制;随机抽取10%样本,重复检测其基因多态性。设计MMP-9启动子区-1562C/T位点的引物,模板DNA经PCR扩增后,得到的PCR产物用SphⅠ酶切,酶切产物经1.25%琼脂糖凝胶电泳分离,检测个体基因型及等位基因型。应用SASV8.1软件进行统计学处理:计量资料用均数±标准差(x±SD)表示;基因频率采用基因计数法计算,组间基因型及等位基因频率的比较采用卡方检验, P<0.05为差异有统计学意义。结果:病例组与对照组在年龄、性别等基本特征比较无显著性差异(P>0.05),两组具有较好的可比性。研究结果显示TGF-β1基因启动子区–509位点出现C/T变异,健康对照组、病例组都以CT基因型为主,两组比较, TGF-β1–509位点各基因型和等位基因的分布频率并无显著性差异(P>0.05)。肝炎后肝硬化组CC基因型频率(37.04%)高于TT基因型频率(18.52%),肝炎后肝硬化组CC基因型频率(37.04%)显著高于慢性肝炎组(10.42%),两组比较差异有显著性(P<0.05)。肝炎后肝硬化组C等位基因频率(59.26%)高于慢性肝炎组(40.74%),两组比较差异尚无显著性(P>0.05)。慢性肝炎组慢轻肝、慢中肝、慢重肝三组比较TGF-β1–509位点各基因型和等位基因的分布频率无显著性差异(P>0.05)。肝炎后肝硬化组活动性肝硬化和静止性肝硬化两组比较TGF-β1–509位点各基因型和等位基因的分布频率无显著性差异(P>0.05)。研究结果显示MMP-9基因启动子区–1562位点出现C/T变异,本研究只检测到CC基因型和CT基因型。病例组与健康对照组比较, MMP-9–1562位点各基因型和等位基因的分布频率没有显著性差异(P>0.05)。慢性肝炎组与肝炎后肝硬化组比较MMP-9–1562位点各基因型和等位基因的分布频率没有显著性差异(P>0.05)。慢性肝炎组慢轻肝、慢中肝、慢重肝三组比较MMP-9–1562位点各基因型和等位基因的分布频率无显著性差异(P>0.05)。肝炎后肝硬化组活动性肝硬化和静止性肝硬化两组比较MMP-9–1562位点各基因型和等位基因的分布频率无显著性差异(P>0.05)。研究中还发现MMP-9–1562位点CT基因型的慢性乙肝患者的HBeAg阳性构成显著高于CC基因型慢性乙肝患者,两组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:TGF-β1–509 CC基因型与慢性乙肝发展的严重程度有关, TGF-β1–509位点C等位基因可能是慢性乙肝发展的易感基因。MMP-9–1562C/T基因多态性与慢性乙肝的发生发展没有的相关性。慢性乙肝患者HBeAg阳性构成比中MMP-9 -1562位点CT基因型比CC基因型占优势,CC基因型可能与HBeAg持续阳性有关。