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目的:观察双酚A对大鼠未成熟Leydig细胞睾酮合成的影响,探讨双酚A对大鼠睾丸Leydig细胞GR、11β-HSD1及StAR蛋白表达的影响,探讨双酚A对大鼠睾丸Leydig细胞类固醇激素代谢关键酶的影响。
方法:出生后第21天雄性Sprague-Dawley大鼠24只根据体重随机分成4组:正常对照组6只、双酚A低剂量组6只(2.4ug/Kg)、中剂量组6只(1mg/Kg)、高剂量组6只(200mg/Kg)。每天早晨8:00-10:00以不同剂量的双酚A给大鼠灌胃(对照组以玉米油灌胃),每次灌胃体积为5ml/kg。出生后第35天染毒结束时处死大鼠,测量大鼠体重、睾丸重；光镜、电镜下观察睾丸Leydig细胞形态学改变；酶联免疫吸附测定法检测血清睾酮浓度；免疫组织化学检测Leydig细胞11β-HSD1及StAR蛋白；Western-blotting检测Leydig细胞GR、11β-HSD1及StAR的蛋白表达水平；逆转录-聚合酶链反应检测睾丸Leydig细胞类固醇激素代谢关键酶StAR、P450scc、3β-HSD、P450c17、17β-HSD及P450arom的mRNA表达水平。
结果:
1.大鼠体重及睾丸重的检测
不同双酚A剂量组大鼠体重,睾丸重及睾丸体重比与正常组对比无显著性差异。
2.大鼠睾丸Leydig细胞光镜检查结果
不同双酚A剂量组大鼠睾丸Leydig细胞光镜结果均未见明显异常。
3.大鼠睾丸Leydig细胞电镜检查结果
高剂量组大鼠睾丸Leydig细胞线粒体肿胀明显。
4.大鼠血清睾酮水平
低剂量组大鼠血清睾酮下降(P<0.05)。
5.免疫组织化学实验结果
11β-HSD1及StAR蛋白在各剂量组大鼠睾丸Leydig细胞胞浆表达阳性。
6.大鼠睾丸Leydig细胞GR、11β-HSD1及StAR的蛋白表达水平中、高剂量组大鼠睾丸Leydig细胞GR蛋白表达明显降低(P<0.01),低剂量组的大鼠睾丸Leydig细胞GR蛋白表达升高(P<0.05)。高剂量组大鼠睾丸Leydig细胞11β-HSD1(P<0.01)及StAR(P<0.05)蛋白表达降低。
7.大鼠睾丸Leydig细胞StAR、P450scc、3β-HSD、P450c17、17β-HSD及P450arom的mRNA表达水平
低剂量组P450scc及3β-HSD mRNA表达水平下降(P<0.05)。中剂量组各关键酶mRNA表达水平未见明显改变。高剂量组StAR及17β-HSD mRNA表达水平下降(P<0.05),而3β-HSD mRNA表达水平升高(P<0.05)。
结论:
1.低剂量双酚A可以抑制大鼠未成熟Leydig细胞的睾酮合成。其机制可能是GR蛋白表达升高,抑制P450scc及3β-HSD mRNA的表达。
2.中剂量双酚A可以抑制GR蛋白表达,但对类固醇激素代谢各关键酶未产生明显改变。对大鼠未成熟Leydig细胞的睾酮合成未产生明显影响。
3.高剂量双酚A可以抑制GR、11β-HSD1及StAR蛋白表达,抑制StAR及17β-HSDmRNA的表达,促进3β-HSD mRNA的表达。对大鼠未成熟Leydig细胞的睾酮成未产生明显影响。