奈达铂通过p53/caspase通道诱导鼻咽癌细胞凋亡和抑制增殖的研究

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[目的]  探讨新一代铂类药物-奈达铂对鼻咽癌细胞凋亡、增殖的影响。鼻咽癌细胞凋亡相关蛋白P53、Bcl-2、caspase家族在奈达铂诱导下蛋白表达水平的变化。  [方法]  1.用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)观察不同浓度奈达铂在不同时间对CNE-2细胞增殖能力的影响。  2.倒置相差显微镜下观察各组CNE-2细胞的形态学特征,同时平板克隆形成检测奈达铂对鼻咽癌细胞克隆形成能力的影响。  3.流式细胞仪检测鼻咽癌细胞CNE-2对照组和奈达铂组细胞凋亡率的变化。  4.Western blotting法检测细胞凋亡蛋白Bax/Bcl-2、p53及caspase家族的表达变化。  [结果]  1.奈达铂对鼻咽癌CNE-2细胞的增殖抑制作用呈时间-剂量依赖性,MTT实验结果显示:随着奈达铂作用浓度和时间增加,CNE-2细胞增殖能力逐渐降低。奈达铂抑制人鼻咽癌细胞CNE-2的细胞克隆形成呈剂量依赖性,1μg/ml的奈达铂几乎完全抑制细胞集落形成。  2.不同浓度奈达铂对CNE-2细胞形态学影响,显微镜下加药组细胞发生形态学变化:细胞出现变大变圆,边缘模糊、毛糙,透光性下降等现象。  3.奈达铂诱导CNE-2凋亡相关蛋白P53表达水平上调具有浓度依赖性。无活性Caspase家族中的相关蛋白caspase3(35Kd)、caspase8(57Kd)、caspase9(47Kd)蛋白表达下调,活性Caspase相关蛋白表达上调,而凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白表达没有明显的变化。  [结论]  1.奈达铂对CNE-2细胞具有明显的增殖抑制作用,呈时间剂量依赖性。  2.奈达铂能明显促进CNE-2细胞的凋亡。  3.奈达铂抑制CNE-2细胞克隆形成,引起CNE-2细胞的形态学变化。  4.奈达铂可能通过P53/Caspase/Bcl-2相关信号通路引起凋亡。其可能是其诱导鼻咽癌细胞凋亡的重要机制。
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