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目的 吸烟是多年来严重威胁人类健康的重要公共卫生问题，不仅能引发肺癌、喉癌、咽癌、口腔癌、食管癌、肾癌、胰腺癌、膀胱癌、宫颈癌等多种肿瘤，还能导致呼吸、心血管、消化系统疾病的发生。近年研究发现吸烟可能通过刺激机体产生氧化应激导致疾病的发生。 本研究以水溶性香烟烟雾溶液（CSS）为处理因素，作用于大鼠淋巴细胞，通过体外实验了解细胞活力及氧化应激状况的变化。用抗氧化物质预处理细胞，观察CSS作用细胞的氧化应激状态的改变。另外，观察香烟烟雾作用下人淋巴细胞不同时点的DNA损伤状况，了解细胞的修复功能。为吸烟致病机制的研究积累资料，为吸烟相关疾病的预防和治疗提供理论依据。 方法 1．淋巴细胞制备用淋巴细胞分离液分离提取淋巴细胞，磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤两次，台盼蓝染色计数细胞，观察细胞存活率大于95％。 2．水溶性香烟烟雾溶液制备两个串联的大包氏管各装有5ml PBS（PH=7.2）作为吸收液，一端连接香烟，另一端连接50ml注射器，2秒内抽吸50ml，间歇58秒后再吸，共吸烟2支，制成0.2支／毫升的水溶性香烟烟雾溶液（CSS）。 3．细胞预处理与染毒①以终浓度为0、1、2、4、8、12、16×10-3支／毫升的CSS处理大鼠淋巴细胞2h研究CSS作用机制。②分别用不同浓度的维生素C（VC）、谷胱甘肽（GSH）或褪黑素（MLT）预处理细胞2h，再用8×10-3支／毫升的中剂量CSS染毒，研究抗氧化物质的干预作用。③以0、1、2、4、8、12、16×10-3支／毫升的CSS染毒细胞，了解DNA损伤状况，选择中剂量，分别作用0、0.5、1、2、3、4、5、6h，观察DNA损伤状况，研究CSS作用于人淋巴细胞的DNA损伤及修复。 4．细胞活力检测调节细胞浓度3×106／ml左右，加入终浓度为10％的Alamar Blue，同时制备元细胞的Alamar Blue对照和RPMI 1640对照。37℃、5％CO2孵育4h。酶标仪分别于540nm和620nm测定吸光度，计算从amar .Blue还原率。 5.细胞内ROS水平测定以PBS调节细胞浓度至1 x 106个/毫升左右，5四OFLZ’，7’一二乙酞二氯荧光素（DCFH一DA）预处理细胞lh，同时制备无细胞对照组。CSS染毒Zh后，荧光分光光度计激发光485lun、狭缝snm，发射光530nm、狭缝10lun测定各组细胞悬液及无细胞对照组中二氯荧光素（DCF）的荧光强度。 6.细胞DNA损伤检测用彗星试验检测DNA损伤。制备三明治细胞夹层，第一层为正常熔点琼脂糖（NMA）层，第二层铺低熔点琼脂糖（LMA）一细胞悬液，第三层为LMA保护层。裂解1.5h，解旋0.5h，25V、300mA电泳20min，中和。50卜扩d澳化乙锭40闪染色，NIKON荧光显微镜绿光激发，目镜测微尺测定彗星细胞头长及全长，计算尾长。 7.超氧化物歧化酶（SOD）活性及脂质过氧化物（LPO）水平检测一70℃反复冻融细胞3次，4℃、100009离心20分钟，取上清。Nitrite法测定SOD活性。荧光法测定LPO。考马斯亮蓝G250测定蛋白质水平校正SOD及LPO值。 8.数据分析用卡方检验分析细胞存活率。月alnar Blue还原率、ROS水平、SOD活力、廿O水平用单因素方差分析进行统计，LSD法比较组间差异。彗星尾长因方差不齐用Dunnett’s竹检验。结果 1 .2一16 x1o一’支/毫升各组大鼠淋巴细胞刀amar Blue还原率显著低于对照组，且随着Css剂量的增加而显著下降。二抓荧光素（DCF）荧光强度、彗星尾长以及LPO水平均显著高于对照组，且随剂量增加而增加。16xlo一，支/毫升组SOD活性显著低于对照组。与对照组相比1 xlo一，支/毫升组LPO水平显著降低、SOD活性则显著增高。 2.与经sxlo一3支/毫升Css染毒但无干预组（css组）相比，0.05FL VC预处理的CSS作用细胞活力增强，细胞内ROS及LPO水平降低，DNA损伤减轻，SOD活性增强，差异均有显著性。与对照组相比，细胞活力、ROS水平和SOD活性降低，DNA损伤增强，LPO水平无显著变化。 3.与CSS组相比，1FL GSH处理的CSS作用细胞活力增加，ROS及LPO水平降低，DNA损伤减轻，SOD活性增强，差异显著。与对照组相比，ROS和LPO水平降低，DNA损伤增强，细胞活力和SOD活性无显著变化。 4.与CSS组相比，0.1OFL MLT处理的CSS作用细胞活力增加，DNA损伤减轻，SOD活性增强，LPO水平降低，差异显著。与对照组相比，细胞活力降低，LPO水平降低，DNA损伤水平和SOD活性无显著变化。 5.8一16 xlo一’支/毫升各组人淋巴细胞彗星尾长显著高于对照组，有剂量一效应关系存在。8 xlo一’支/毫升Css作用于细胞后随着时间的延长彗星尾长先增加后降低，于3h达到最高值，Zh起各组细胞彗星尾长显著高于Oh组;与3h组相比3h后各组彗星尾长显著降低。结论 1 .CSS作用使细胞活力降低，细胞内ROS产生增加，DNA和脂质发生损伤，并呈现剂量一效应关系。高剂量时SOD活性下降。低剂量CsS作用诱导细胞SOD活性、使细胞氧化性损伤维持在基础水平甚至更低。 2.体外实验中，0.05FL VC干预能有效增强细胞活力，通过清除细胞内自由基、增强SOD活性降低大鼠淋巴细胞脂质过氧化水平、减轻DNA损伤，有效拮抗CSS所致氧化损伤。