【摘 要】
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目的:本实验通过分别检测正常对照(WT)组、WT+鱼藤酮(Rotenone,Rot)组、Rot+VMAT2(+/-)组、VMAT2(+/-)组共四组C57BL/6小鼠糖水偏好试验、悬尾实验等行为学改变,以及利用HPLC
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目的:本实验通过分别检测正常对照(WT)组、WT+鱼藤酮(Rotenone,Rot)组、Rot+VMAT2(+/-)组、VMAT2(+/-)组共四组C57BL/6小鼠糖水偏好试验、悬尾实验等行为学改变,以及利用HPLC法检测脑组织内DA、5-HT、NE、DOPAC、HVA等神经递质浓度变化,探讨VMAT2基因对帕金森病小鼠脑纹状体内单胺类神经递质及非运动症状的影响,进一步研究VMAT2基因联合环境毒素对帕金森病非运动症状发挥作用的机制。方法:选取12月龄左右的C57BL/6雄性小鼠做为试验对象分为四组,第一组选取野生型(Wildtype,WT)C57BL/6小鼠作为正常对照组;第二组选用WT小鼠并用鱼藤酮连续灌胃4个月制备PD动物模型组;第三组使用出生时即敲低VMAT2基因50%的C57BL/6小鼠组;第四组选取VMAT2基因50%敲低小鼠使用连续鱼藤酮灌胃处理4个月后的造模组。造模成功后,对各组小鼠进行检测抑郁程度的糖水偏好试验及悬尾实验。行为学实验结束后将各组动物处死并快速取出脑组织,将取得的脑组织标本处理后用高效液相色谱法(HPLC)分别测定脑组织中DA、DOPAC、HVA、5-HT、NE含量,并计算各组小鼠脑组织中DOPAC/DA比值的变化。应用统计学方法分析各组小鼠行为学及神经递质含量各组之间的差异变化。结果:糖水偏好实验:WT+Rot组、VMAT2(+/-)组、VMAT2(+/-)+Rot组糖水偏好度与WT组相比均有所降低,VMAT2(+/-)+Rot组糖水偏好度与VMAT2(+/-)组相比也有所降低,差异均具有统计学意义(p<0.05)。悬尾实验:WT+Rot组、VMAT2(+/-)组、VMAT2(+/-)+Rot组悬尾不动时间与WT组相比显著延长,VMAT2(+/-)+Rot组悬尾不动时间与VMAT2(+/-)组相比也有所降低,差异均具有统计学意义(p<0.05)。HPLC:VMAT2(+/-)+Rot组、VMAT2(+/-)组、WT+Rot组相比于WT组,DA、5-HT、NE含量均明显降低,差异具有统计学意义(p<0.05)。VMAT2(+/-)+Rot组相比于VMAT2(+/-)组,DA、5-HT、NE含量亦明显降低,差异具有统计学意义(p<0.05)。结论:1.鱼藤酮造模PD组小鼠出现抑郁的症状,行为学及病理生理学均有明显改变;提示:一定情况下,鱼藤酮不仅能模拟帕金森病的运动症状,且能反应非运动症状的变化。VMAT2基因敲低小鼠亦出现明显抑郁的行为学及病理生理变化,说明VMAT2杂合子小鼠能模拟帕金森病相关抑郁的非运动症状。VMAT2基因敲低联合鱼藤酮组出现最为明显的抑郁症状,表现于行为学及病理生理学的变化,表明VMAT2基因对帕金森病有保护作用,VMAT2基因敲低联合环境毒素建立帕金森病动物模型,能更好的模拟帕金森病的非运动症状。2.VMAT2基因与环境毒素共同作用通过调控单胺类神经递质从而参与帕金森病相关非运动症状的发生。
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