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本研究分为二部分：
第一部分：糖尿病大鼠不同时间节点肾脏组织中8-羟基脱氧鸟苷、MMP-9 mRNA、MMP-9及Podocalyxin mRNA的变化
目的：观察糖尿病大鼠不同时间节点8-羟基脱氧鸟苷、MMP-9 mRNA、MMP-9及Podocalyxin mRNA的变化。
方法：40只大鼠随机分为空白对照组(4只)、糖尿病组(36只)。糖尿病组用链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射造模。糖尿病组模型成功后随机分组：第1天处死组、第3天处死组、第7天处死组、第10天处死组、第14天处死组。期间各组大鼠未给予任何药物干预。处死后取材,FQ-PCR法检测各组大鼠肾脏组织8-羟基脱氧鸟苷水平、MMP-9 mRNA及Podocalyxin mRNA的变化,免疫组化法观察MMP-9变化。
结果：
1.8-羟基脱氧鸟苷水平：与空白对照组大鼠相比较,DM第7、10、14天组肾脏组织中8-羟基脱氧鸟苷表达均有所升高,与空白对照组相比,有统计学意义(P<0.1,P<0.05)。血糖水平与8-羟基脱氧鸟苷水平呈正相关(r=0.672,p<0.01);高糖持续时间与8-羟基脱氧鸟苷水平呈正相关(r=0.862,p<0.01)。
2.MMP-9 mRNA水平：空白对照组与DM组大鼠肾脏组织中均有MMP-9mRNA的表达。空白对照组与DM各组相比,无统计学意义(P>0.05)。血糖、高糖持续时间及8-羟基脱氧鸟苷水平与MMP-9 mRNA均不相关。
3.免疫组化提示：糖尿病组MMP-9在肾小球内主要表达于基底膜,以第7天组MMP-9着色最强；定量分析示第7天组MMP-9达峰。8-羟基脱氧鸟苷水平、血糖及高糖持续时间与MMP-9呈正相关。
4.与空白对照组大鼠相比较,糖尿病组第7天处死组、第10天处死组、第14天处死组肾脏组织中Podocalyxin mRNA表达均有所下降,与空白对照组相比,有统计学意义(P<0.05)。8-羟基脱氧鸟苷与Podoca]yxin mRNA呈负相关。(r=-0.422,p<0.05),高糖持续时间与Podocalyxin mRNA呈负相关(r-=0.389,p<0.05)。血糖与Podocalyxin mRNA不相关。
结论：
1.DM大鼠肾脏组织内8-羟基脱氧鸟苷水平随着时间的延长而逐渐升高。8-羟基脱氧鸟苷水平与血糖及高糖持续时间有关。
2.DM大鼠肾脏组织内MMP-9 mRNA不受血糖、高糖持续时间及8-OH-DG等因素影响。
3.DM大鼠肾脏组织内MMP-9水平于成模后第7天第一次达峰,升高的MMP-9主要表达于基底膜区。MMP-9水平与血糖、高糖持续时间、8-羟基脱氧鸟苷有关。
4.DM大鼠肾脏组织内Podocalyxin mRNA水平随着成模后时间的延长而逐渐降低,与8-羟基脱氧鸟苷水平及高糖持续时间有关。
第二部分：葛根素的抗氧化作用及其对足细胞的保护作用的研究。
目的：观察葛根素对糖尿病大鼠足细胞的保护作用,并进一步研究药物作用机制。
方法：60只大鼠随机分为五组：空白对照组、糖尿病模型组、葛根素腹腔注射组、葛根素灌胃组、科素亚灌胃组。除空白对照组外,其余四组用链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔内注射造模。成模后给予相应处理,共治疗7天,期间每天观察一般状况并监测尾尖血糖,处死后取材,通过FQ-PCR法检测各组大鼠肾脏组织8-羟基脱氧鸟苷水平、MMP-9 mRNA、Podocalyxin mRNA。免疫组化观察MMP-9的表达,透射电镜观察足细胞形态。
结果：
1.葛根素灌胃组第3天时血糖降至谷值,与基线相比较,具有统计学意义(P<0.01);葛根素腹腔注射组,第4天、第5天、第7天血糖明显下降,具有统计学意义(P<0.05);科素亚灌胃组第2、3、4、5、6天血糖下降,具有统计学意义(P<0.05)。
2.8-羟基脱氧鸟苷：与空白对照组相比,糖尿病模型组肾脏组织8-羟基脱氧鸟苷水平明显升高,具有统计学意义(P<0.05);与糖尿病模型组相比,葛根素腹腔注射组、葛根素灌胃组、科素亚灌胃组肾脏组织8-羟基脱氧鸟苷水平降低,具有统计学意义(P<0.05)。与科素亚灌胃组相比,葛根素腹腔注射组、葛根素灌胃组肾脏组织8-羟基脱氧鸟苷水平降低,具有统计学意义(P<0.05)。
3.肾脏组织MMP-9 mRNA水平：与空白对照组相比,各组肾脏组织MMP-9 mRNA水平均不具有统计学意义(P>0.05);
4.肾脏组织MMP-9免疫组化：与空白对照组相比,糖尿病模型组、科素亚灌胃组肾脏组织MMP-9阳性表达面积明显升高,具有统计学意义(P<0.05);与糖尿病模型组相比,葛根素腹腔注射组、葛根素灌胃组肾脏组织阳性表达面积明显降低,具有统计学意义(P<0.05)。
5.肾脏组织Podocalyxin mRNA水平：与空白对照组相比,糖尿病模型组、科素亚灌胃组肾脏组织Podocalyxin mRNA水平明显降低,具有统计学意义(P<0.05);与糖尿病模型组相比,葛根素腹腔注射组肾脏组织Podocalyxin mRNA水平升高,具有统计学意义(P<0.05)。与科素亚灌胃组相比,葛根素腹腔注射组肾脏组织Podocalyxin mRNA水平升高,具有统计学意义(P<0.05)。
6.透射电镜观察足细胞形态：空白对照组足细胞形态完好,糖尿病模型组大鼠足细胞受损,突出表现在足突区,科素亚灌胃组及葛根素灌胃组、葛根素腹腔注射组足细胞形态不完好,但略好于糖尿病模型组。
结论：
1.葛根素具有良好的抗氧化作用。
2.葛根素可能过抗氧化作用调控MMP-9、Podocalyxin mRNA水平起到保护足细胞的作用。