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前言:前列腺癌占男性恶性肿瘤相关致死原因的第二位。近年来，在中国前列腺癌的发病率和病死率有逐年上升的趋势。新生血管的形成在前列腺癌的发生和转移中起到重要的作用，血管内皮生长因子在这个过程中是一个关键的介导。在体内，当肿瘤细胞释放血管生成物质，如成纤维生长因子(FGF)和血管内皮生长因子(VEGF)，可传递预形成血管壁的信号，从而开始血管形成的过程。肿瘤条件培养上清液中可能含有大量的促细胞分裂因子，几乎所有由肿瘤细胞分泌的生长因子都可以诱导内皮细胞增殖，最终经过分化形成新的血管壁。
钙离子是普遍的细胞内信使，控制多种细胞活动过程，如基因的转录，肌肉的收缩和细胞的增殖。TRP通道可能与肿瘤细胞增殖有关。这是因为TRP都是钙通道，允许钙离子进入细胞内。而在细胞内，钙离子作为第二信使，控制着细胞内一系列重大生物活动，尤其是细胞的增殖。最近有研究表明，TRPC6通道参与多种细胞的增殖过程，本实验观察DU145细胞条件培养液作用于hUVEC后，细胞增殖和TRPC6基因及蛋白的表达情况，从而探讨TRPC6在hUVEC细胞增殖过程中的作用。
实验方法:
1、DU145细胞的培养及肿瘤条件培养液的制备
在37℃，5％CO2，正常氧浓度，饱和湿度条件下，10％的胎牛血清，PRMI1640培养基培养DU145细胞至对数生长期，弃去培养液，重新加入不含血清的PRMI1640培养液继续培养48h后，收集培养液上清，即肿瘤细胞条件培养液(TCM)，-20℃冰箱冻存，备用。
2、hUVEC细胞的培养
37℃，5％CO2，正常氧浓度，饱和湿度条件下，10％的胎牛血清，DMEM培养基培养hUVEC细胞。
3、实验分组
对照组：用无血清DMEM培养液培养hUVEC;实验组：将制备好的肿瘤细胞条件培养液与无血清DMEM培养液分别按照1：2、1：1、2：1比例混合后培养hUVEC，作用48h。加干预因素前经血清饥饿法达同步化。
4、hUVEC细胞增殖率的检测
将hUVEC细胞以5×103/孔的密度种植于96孔板，每孔200μL，37℃、5％CO2条件下培养，按实验分组加入不同浓度的肿瘤条件培养液，每组设6个复孔，继续培养48h后进行MTT检测。检测时在培养板内每孔内加入MTT染色剂20μL，培育4h，吸取孔内液体，加入二甲基亚砜150μL，振荡10min，以570nm波长酶标仪检测吸光值，用只加培养液不加细胞的空白孔调零。
5、RT-PCR法检测hUVEC细胞TRPC6的mRNA的表达
加入Trizol提取总RNA后，反转录成cDNA，PCR反应后电泳检测。
6、Western blot检测hUVEC细胞TRPC6蛋白质的表达
提取hUVEC细胞蛋白质，测定蛋白浓度；蛋白质的聚丙烯酞胺凝胶电泳；免疫印迹法；蛋白印迹的分析。
实验结果:
一、肿瘤条件培养液对hUVEC细胞增殖的影响
经过48h的作用，不同浓度的肿瘤细胞条件培养液对hUVEC增殖的影响，与空白对照组比较，各个浓度组的吸光度有显著的增加。各实验组中，hUVEC的增殖呈浓度依赖性，肿瘤培养上清液的浓度的增加，细胞增殖明显增强。
二、RT-PCR检测TRPC6mRNA的表达
实验组条带灰度值高于空白对照组，并且随肿瘤条件培养液浓度增高，表达增高，各组间有显著性差异。
三、Western-blot检测TRPC6蛋白质的表达
在蛋白质水平，实验各组与对照组的TRPC6表达(TRPC6/β-actin)差异亦具有统计学意义，并且随肿瘤条件培养液浓度增高，表达增高，各组间有差异有统计学意义，检测结果与RT-PCR基本一致。
结论:
1、DU145细胞条件培养液对hUVEC有明显的促增殖作用。
2、DU145细胞条件培养液促进TRPC6通道的表达。
3、TRPC6可能在hUVEC增殖中起重要作用。