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复发性流产(RSA)是引起女性不育症最常见的因素,其病因复杂,除了常见的染色体异常、解剖异常、内分泌失调及感染、自身免疫病等因素外,约有50﹪左右患者至今病因未明,称为原因不明性复发性流产(URSA),是临床上较为常见的威胁女性生殖健康的疾病.
现代生殖免疫学观点认为妊娠是一种同种免疫反应,母体能接受半同种异体胚胎刺激并产生有利于免疫耐受的营养环境,原因不明复发性流产的发生可能与母胎间同种免疫异常有关.近期研究表明,早孕期蜕膜组织巨噬细胞倾向于MΦ2型,可分泌较多的IL-10等抑制性细胞因子,在蜕膜局部形成免疫耐受中起调节作用.而在URSA患者蜕膜组织中,巨噬细胞的功能是如何变化的?目前关于此方面的研究国内外尚未见报道.本文拟对正常早孕妇女及URSA患者蜕膜巨噬细胞分泌细胞因子的功能进行检测,以明确巨噬细胞在URSA发病过程中的功能变化.
非生殖领域的研究表明,巨噬细胞的功能可受其表面分子凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)、CD47和CD36的相互作用所调控.基于上述研究,认为TSP-1在母胎界面也可能具有调节巨噬细胞的功能,在形成和维持母胎免疫耐受中起重要作用,同时对URSA的发生有重要的影响.为了证明上述推断,本文主要完成了以下工作:
(1) 通过ELISPOT法检测发现,URSA患者蜕膜巨噬细胞分泌IL-10的量比正常早孕妇女显著降低,而分泌IFN-γ巨噬细胞数两组对象没有差异,这说明URSA的发病与蜕膜组织巨噬细胞功能异常有关.
(2)通过Real time PCR.方法检测正常早孕妇女及URSA患者蜕膜 TSP-1 mRNA的表达,发现URSA患者 TSP-1 mRNA表达较正常早孕组降低(P<0.05).这提示TSP-1 表达下降可导致URSA患者巨噬细胞功能失调,母胎界面平衡被打破,胎儿受到母体免疫系统的攻击,最终引发流产.
(3) 应用流式细胞技术对妊娠早期外周血和蜕膜组织巨噬细胞表面TSP-1、CD47、CD36表达进行测定,这在国内外未见相关报道.与正常早孕妇女相比,URSA患者蜕膜面巨噬细胞TSP-1表达水平下降,CD36表达水平升高,而CD47表达水平无差异.这表明蜕膜面巨噬细胞功能变化与uRSA发病有关.
(4)通过ELISPOT法检测发现,无论在正常早孕组还是在URSA组,TSP-1干预培养可提高蜕膜组织巨噬细胞分泌IL-10的量,有利于诱导母胎免疫耐受.加入抗TsP-1抗体,使其与细胞表面的TSP-1分子结合,可阻断TSP-1的促进分泌IL-10作用.
本文重点研究了uRSA患者蜕膜组织巨噬细胞分泌细胞因子功能的变化,以及蜕膜组织巨噬细胞表面TSP-1表达与URSA的关系.实验发现URSA患者蜕膜面巨噬细胞TSP-1表达水平下降,导致URSA患者巨噬细胞功能失调,母胎界面平衡被打破,最终引发流产,充分证明了蜕膜面巨噬细胞功能变化与uRSA发病有关.该研究为探讨妊娠中母胎界面的相互作用机制开辟了新思路,有助于深入了解URSA的发病机理,为临床诊断治疗提供新的理论依据.