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目的:蛋白酶体抑制剂是近几年来抗肿瘤研究的热点之一，研究发现其对多发性骨髓瘤等多种肿瘤细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。本课题旨在研究蛋白酶体抑制剂MG132对人肝癌7721细胞的增殖抑制的影响及诱导凋亡的机制中与内质网应激的联系。
方法:为观察MG132对7721细胞生长增殖的影响，以不同浓度的MG132(2uM，5uM，10uM)处理细胞24小时后，用MTT法检测7721细胞的增殖情况；用流式细胞术检测MG132对诱导细胞凋亡的情况；为了验证MG132对7721细胞的诱导凋亡作用，采用了Hoechst染色法在荧光显微镜下观察细胞凋亡；为探讨蛋白酶体抑制剂MG132影响7721细胞增殖和诱导凋亡的机制，特别是与内质网应激的关系，首先择取了5uM浓度的MGl32处理细胞24小时，然后运用以下方法检测可能参与其凋亡诱导作用的各分子变化：用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测7721细胞中内质网应激的标志性分子Bip/GRP78和XBP-1的表达变化；用Western blot检测内质网标志性分子及凋亡相关转录因子CHOP的表达变化；为了探讨细胞通过内质网应激途径参与凋亡的机制，还用Western blot方法检测了内质网应激特异性诱导的caspase-12，以及其下游的caspase-9和caspase-3的剪切表达情况。
结果:MTT法检测结果显示，不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG132对人肝癌7721细胞的生长增殖有明显的抑制作用，流式细胞仪检测发现MG132处理后的7721细胞出现了明显凋亡，且这种增殖抑制和诱导凋亡作用均表现出浓度依赖性，Hoechst染色也发现了凋亡小体。以浓度为5uM的MGl32处理7721细胞24小时后RT-PCR结果显示内质网应激标志分子Bip/GRP78的mRNA表达显著增高，Western blot结果也可见其蛋白表达的增高；RT-PCR结果显示与阳性对照相比，加药处理后的7721细胞中XBP1 mRNA未见剪接，Western blot结果也表明了未剪接的XBP1蛋白表达增加；Western blot检测CHOP表达发现其蛋白表达显著增高。Western blot检测发现内质网应激诱导的凋亡信号通路中标志性分子caspase-12发生了剪切激活，其下游的caspase-9和caspase-3也发生了剪切激活。
结论:蛋白酶体抑制剂MGl32可诱导人肝癌7721细胞出现生长增殖抑制和凋亡，由于泛素—蛋白酶体通路受阻导致大量未折叠和错误折叠蛋白堆积在内质网中引起内质网应激，但未折叠蛋白反应(UPR)却未能被高效激活，因此推测细胞经过长时间的内质网应激而无法通过UPR途径进行恢复，最后导致细胞凋亡。但是MG132如何影响UPR通路的机制还需进一步的研究。