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课题组前期通过胆固醇和大豆卵磷脂对凡纳滨对虾生长、抗弧菌及亚硝态氮胁迫的影响,得出了凡纳滨对虾对胆固醇和大豆卵磷脂的最适需求量。在此研究的基础上,本实验继续探究饲料中胆固醇和大豆卵磷脂对凡纳滨对虾免疫、抗低温胁迫及低氧胁迫能力的影响,并探究了饲料中胆固醇和大豆卵磷脂对凡纳滨对虾的交互影响。为探究饲料中胆固醇(CH)含量对淡水养殖的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)免疫相关基因表达量及抗胁迫能力的影响,在鱼粉含量为10%的基础饲料中设计胆固醇添加量分别为0.00(CH0)、1.00(CH1)、2.00(CH2)、3.00(CH3)、4.00(CH4)mg/g的五组等氮等能饲料(实测胆固醇含量依次为0.54、1.51、2.54、3.04和4.14 mg/g)。选取初始体重为(0.14±0.03)g的凡纳滨对虾,经8周养殖实验后检测对虾副溶血弧菌感染前后免疫相关基因(Toll受体、IMD和溶菌酶)表达量,并检测急性低氧胁迫和低温胁迫下对虾的耐受性能。结果表明:弧菌感染前CH2组与CH3组对虾鳃组织中Toll受体mRNA的表达量无显著性差异(P>0.05),显著高于其他组(P<0.05)。而CH3组对虾IMD mRNA的表达量显著高于其他组(P<0.05),但与CH4组无显著性差异(P>0.05)。对虾鳃组织中溶菌酶mRNA表达量随饲料CH含量的增加呈升高的趋势(P>0.05)。急性副溶血弧菌感染后,饲料中CH含量显著影响对虾鳃组织中Toll受体、IMD和溶菌酶mRNA表达量。感染后对虾鳃组织中Toll受体mRNA和溶菌酶mRNA表达量峰值在CH2组最大(P<0.05);而IMD mRNA表达量峰值在CH1组最大。弧菌感染48小时内,对虾鳃组织中Toll受体和溶菌酶mRNA表达量变化幅度在CH2组最大,而鳃组织中IMD mRNA表达量变化幅度最大的是CH1组,其次为CH2组;并且大部分组Toll受体基因表达量恢复到初始值大小,而各组IMD基因未恢复到初始值附近。急性低氧胁迫下各组凡纳滨对虾的耗氧量和致死溶氧浓度均无显著性差异(P>0.05)。急性低温胁迫下各组对虾死亡率无显著性差异(P>0.05);但CH3组与CH4组对虾存活时间显著高于其他组(P<0.05)。为探究饲料中大豆卵磷脂(SL)添加量对淡水养殖的凡纳滨对虾免疫及抗胁迫能力的影响,在10%鱼粉饲料基础上设计五组SL添加量分别为0(SL0)、1%(SL1)、2%(SL2)、3%(SL3)和4%(SL4)的等氮等能饲料,各组饲料中磷脂酰胆碱(Phosphatidylcholine,PC)含量依次为1.87、2.61、3.45、4.20和5.41 mg/g。分别养殖初始体重为0.14±0.03 g的凡纳滨对虾八周,检测副溶血弧菌感染前后对虾免疫相关基因(Toll受体、IMD和溶菌酶mRNA)的表达量,并检测急性低氧胁迫和低温胁迫下对虾的耐受性能。结果表明:SL2组对虾Toll受体mRNA表达量显著高于其他组(P<0.05),而SL3组对虾IMD mRNA表达量显著高于其他组(P<0.05);对虾腮组织中溶菌酶mRNA表达量随SL水平的增加呈先升高后降低的趋势(P>0.05)。急性感染副溶血弧菌后,饲料SL含量影响各组对虾鳃组织中Toll受体、IMD和溶菌酶mRNA表达量,并且影响三个免疫基因表达量的峰值。急性感染后各组对虾鳃组织中Toll受体、IMD和大部分组的溶菌酶mRNA的表达量峰值均出现在24 h,但SL1组溶菌酶mRNA的表达量峰值出现在42 h。感染后SL2组对虾Toll受体、IMD和溶菌酶mRNA表达量峰值显著高于SL0组(P<0.05)。急性感染48 h后SL2组Toll受体、IMD和溶菌酶基因的相对表达量变化幅度最大。急性低氧胁迫下,各组对虾的耗氧量和致死溶氧浓度均无显著性差异(P>0.05)。急性低温胁迫下,SL3组对虾死亡历时显著高于SL0组(P<0.05),并与其他组无显著差异(P>0.05)。急性低温胁迫下18°C时SL2组对虾死亡率显著低于SL1组(P<0.05),与其他组无显著性差异(P>0.05);17°C时SL2组和SL4组对虾死亡率无显著性差异(P>0.05),但均低于SL1组死亡率(P<0.05)。在此基础上,研究了CH和SL联合添加对凡纳滨对虾生长、生化组成、免疫及抗胁迫能力的影响。按3×3双因素设计,在10%鱼粉饲料中分别添加CH(0、0.2%和0.4%)和SL(0、2%和4%),制成九组等氮等能的凡纳滨对虾饲料。八周养殖实验结束后,检测对虾的生长性能、肌肉常规、磷脂酰胆碱和胆固醇含量、消化酶活性、血清免疫酶活性及溶藻弧菌感染前后免疫相关基因(Toll受体、IMD和溶菌酶)的表达量、抗溶藻弧菌胁迫能力、抗亚硝态氮胁迫能力及抗低氧胁迫能力。结果显示:1、饲料中CH水平的增加显著提高了凡纳滨对虾终末体重(FBW)和特定生长率(SGR)(P<0.05),但对存活率(SR)、饲料系数(FCR)无显著影响(P>0.05);而饲料中SL水平对凡纳滨对虾的生长性能无显著影响(P>0.05);并且CH和SL对凡纳滨对虾生长性能的影响没有显著的交互作用(P>0.05),而0.4%CH-2%SL组合对虾表现出最好的生长性能。肌肉中粗脂肪、粗灰分和胆固醇含量随饲料中CH水平增加而升高(P<0.05),随着饲料SL水平的增加,肌肉中粗蛋白含量降低(P>0.05),并且肌肉PC和胆固醇含量减少(P<0.05);饲料CH和SL对凡纳滨对虾肌肉粗蛋白、PC和胆固醇含量的影响有显著的交互作用(P<0.05)。对虾肝胰腺蛋白酶活力在0.2%CH时最低(P<0.05),CH水平与淀粉酶活力呈正相关性(P<0.05),而与脂肪酶活力呈负相关性(P<0.05);随SL水平的增加,对虾肝胰腺蛋白酶和脂肪酶活力先升高后降低(P<0.05),而淀粉酶活力下降(P<0.05);饲料中CH和SL对凡纳滨对虾肝胰腺消化酶活力的影响具有显著的交互作用(P<0.05)。饲料中CH水平对凡纳滨对虾鳃中Toll受体、溶菌酶和IMD mRNA表达量无显著性差异(P>0.05);随SL水平的增加,Toll受体和IMD mRNA表达量上升(P>0.05),而溶菌酶mRNA表达量先降低后升高(P<0.05);饲料中添加CH和SL对Toll受体和溶菌酶mRNA表达量有显著的交互作用(P<0.05),但对IMD mRNA表达量无显著的交互影响(P>0.05)。2、随饲料中CH水平的增加,凡纳滨对虾血清溶菌酶活性显著升高(P<0.05),而对虾SOD活性先降低后升高(P<0.05)。饲料中SL显著提高了对虾SOD活性(P<0.05),但不影响溶菌酶活性(P<0.05)。CH和SL的交互作用显著影响对虾血清SOD活性(P<0.05),但对溶菌酶活性影响不显著(P>0.05)。饲料CH和SL添加水平显著影响人工急性感染溶藻弧菌后凡纳滨对虾Toll受体、IMD和溶菌酶基因的相对表达量。随饲料CH水平的增加,对虾Toll受体、IMD和溶菌酶mRNA表达量的峰值均随之增加;并且Toll受体mRNA表达量峰值出现延后,而IMD mRNA和溶菌酶mRNA表达量峰值出现提前。随饲料SL添加量的增加,Toll受体mRNA表达量的峰值先升后降,而IMD mRNA和溶菌酶mRNA表达量的峰值逐渐增大;并且Toll受体mRNA表达量峰值出现提前,而溶菌酶mRNA表达量峰值出现延后。溶藻弧菌感染后0.4%CH-4%SL组对虾96h累积死亡率最低(P<0.05)。而在亚硝态氮胁迫后,96 h时累计死亡率在0.2%CH-2%SL组最低(P<0.05)。饲料中CH和SL对低氧胁迫下凡纳滨对虾的致死溶氧浓度无显著的交互作用(P>0.05);凡纳滨对虾致死溶氧浓度与饲料CH水平成负相关(P<0.05),而SL水平对致死溶氧浓度无显著性影响(P>0.05);0.4%CH-2%SL组对虾致死溶氧浓度最低。