【摘 要】
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实验目的探讨线粒体分裂抑制剂(Mdivi-1)在海马神经元缺血再灌注损伤中的神经保护作用及其机制实验方法选择出生24h内的SD大鼠,原代培养海马神经元,以7×105/ml的细胞密度接
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实验目的探讨线粒体分裂抑制剂(Mdivi-1)在海马神经元缺血再灌注损伤中的神经保护作用及其机制实验方法选择出生24h内的SD大鼠,原代培养海马神经元,以7×105/ml的细胞密度接种到25cm×25cm培养瓶中,采用随机数字表法,将其分为4组(n=36)：对照组(normal group)细胞不进行任何处理；赋形剂组(vehicle group)细胞加入赋形剂(DMSO,终浓度<0.1%)孵育40min;缺血再灌注损伤组(I/R group)细胞进行缺氧复氧处理；线粒体分裂抑制剂组(mdivi-1group)细胞在缺氧复氧前加入50μmol/L线粒体分裂抑制剂(溶于DMSO, DMSO浓度<0.1%)孵育40min。采用氧糖剥夺法建立大鼠海马神经元缺血再灌注损伤模型,缺氧6h复氧20h后用ELISA法检测活性氧(ROS)水平、用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot法检测线粒体分裂蛋白(Drp1)、Bcl-2、Bax和Cyt C蛋白的表达水平及Bcl-2/Bax蛋白比值的变化。实验结果与对照组比较,赋形剂组各个检测指标差异没有统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,缺血再灌注损伤组海马神经元ROS含量和细胞凋亡率升高,Drp1、Bax和Cyt C蛋白的表达上调,而Bc1-2蛋白表达下调,Bcl-2/Bax蛋白比值降低(P<0.05)。与缺血再灌注损伤组比较,线粒体分裂抑制剂组海马神经元ROS含量和细胞凋亡率降低、Drp1、Bax和Cyt C蛋白的表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,Bcl-2/Bax蛋白比值升高(P<0.05)。实验结论Mdivi-1可减轻海马神经元缺血再灌注损伤中细胞的氧化应激损伤从而减少细胞的凋亡,其机制可能是通过线粒体介导的凋亡通路。
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