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本课题选择脑得生片(收载于中国药典2010版一部1105页)为模型药物。利用血药浓度法研究脑得生片中不同有效成分在动物体内的药动学参数差异,同时利用ADME／Tox技术平台研究脑得生片不同有效成分在动物体内排泄参数差异,并结合其与复方药动学的相互作用,最终从多个层次阐明脑得生片的复方药动学的特点,拟形成中药复方药动学研究的思路和方法,为中药复方配伍的合理性提供实验依据。本论文主要研究内容及结论如下:
1、利用HPLC法对脑得生片及红花提取物中的羟基红花黄色素A(hydroxysaffloryellow A,HSYA)含量进行了测定,为方中有效成分HSYA的药代动力学实验研究的给药剂量提供依据。实验测得脑得生片中HSYA含量为5.858 mg·g-1,红花提取物中HSYA含量为70.814 mg·g-1。
2、研究了HSYA单体、红花提取物及复方脑得生片中HSYA在大鼠体内的药代动力学:
(1)建立了大鼠血浆中HSYA含量的高效液相色谱分析方法。采用甲醇沉降蛋白后直接进样分析,流动相为甲醇-乙腈-0.7％磷酸水溶液(26:2:72),检测波长为403 nm。线性范围为0.03～2.56 mg·L-1,相关系数R=0.9994。高,中,低浓度样品回收率分别为98.4％、92.8％、99.3％。此方法准确可靠、方便快捷、灵敏度高、专属性强,满足了本文中的分析要求。
(2)研究了HSYA单体、红花提取物及复方脑得生片中HSYA在大鼠体内的药动学特征。结果表明,大鼠分别灌胃给予HSYA单体、红花提取物及复方脑得生片后,HSYA的药动学特征比较显示,其药-时曲线均符合二房室模型,其药动学参数经方差分析有显著性统计学差异,其中单体组AUC0→∞显著高于提取物组,Tmax显著小于提取物组,显示红花中其成分影响了HSYA的吸收速率,而脑得生片组的AUCD0→t、AUC0→∞和Cmax明显高于红花提取物组和单体组(P<0.05),Tmax显著小于红花提取物组和单体组(P<0.05),显示脑得生片中的其他配伍药材对其HSYA在体内的过程有较大影响,促进了HSYA在大鼠体内的吸收,加快其吸收速率,提高了HSYA口服吸收的生物利用度。
3、研究了羟基红花黄色素A、红花提取物及复方脑得生片中HSYA在大鼠体内的胆汁排泄动力学:
(1)建立了大鼠胆汁中HSYA含量的高效液相色谱分析方法。采用甲醇沉降蛋白后直接进样分析,流动相:A:甲醇-乙腈(26:2)、B:0.7％磷酸水溶液,梯度洗脱A:0 min,20％；10.5min,30％；16 min,40％；平衡时间:5 min,检测波长:403 nm；线性范围为0.05～4.8 mg·L-1,相关系数R=0.9993。高,中,低浓度样品回收率均大于90％,RSD小于2.5％,此方法准确可靠、方便快捷、灵敏度高、专属性强,满足了本文中的分析要求。
(2)研究了HSYA、红花提取物及复方脑得生片中HSYA在大鼠体内的胆汁排泄特征。结果表明,灌胃后其胆汁排泄参数具有显著差异,灌胃HSYA单体和红花提取物后的HSYA胆汁排泄量和排泄率显著高于复方组(P<0.05),显示脑得生片复方配伍减少了HSYA胆汁外排效应。
4、研究了HSYA、红花提取物及复方脑得生片中HSYA在大鼠体内的尿液及粪便排泄动力学:
(1)建立了大鼠尿液及粪便中HSYA含量的高效液相色谱分析方法。采用甲醇沉降蛋白后直接进样分析,流动相:A:甲醇-乙腈(26:2)、B:0.7％磷酸水溶液,梯度洗脱A:0 min,20％；10.5min,30％；16 min,40％；平衡时间:5 min,检测波长:403 nm；线性范围分别为0.1～100μg·mL-1(尿液)、0.1～200μg·ml-1(粪便),相关系数分别R=0.9996(尿液)、R=0.9992(粪便)。高、中、低浓度样品回收率均大于85％,RSD小于2.0％,此方法准确可靠、方便快捷、灵敏度高、专属性强,满足了本文中的分析要求。
(2)研究HSYA、红花提取物及复方脑得生片中HSYA在大鼠体内的尿液及粪便排泄特征。结果表明,灌胃HSYA单体、红花提取物和复方脑得生片后其尿液及粪便排泄参数具有显著差异,灌胃HSYA单体、红花提取物和复方脑得生片后HSYA在粪便和尿液中24 h累计排泄总量分别为给药量的47％、56％和27％左右,单体组和提取物组的HSYA粪便和尿液排泄量和排泄率显著高于复方组(P<0.05)。显示复方配伍减少其效成分HSY以原型排除体外,增加了其在大鼠体内的利用程度。