【摘 要】
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研究背景:CRISPR/Cas9技术具有实验周期短和编辑效率高的优势,已广泛运用到基因编辑和基因敲除小鼠模型的构建中。但是,由于致死基因缺失会导致动物死亡,利用一般的CRISPR/Cas9技术通常造成致死基因全身性敲除的首建鼠(F_0代)无法出生或性成熟前死亡。研究方法:本研究开发了一种可传代繁育的致死基因全身性敲除小鼠模型的制备方法。(1)利用生物信息学系统设计构建致死基因CRISPR/Cas9
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研究背景:CRISPR/Cas9技术具有实验周期短和编辑效率高的优势,已广泛运用到基因编辑和基因敲除小鼠模型的构建中。但是,由于致死基因缺失会导致动物死亡,利用一般的CRISPR/Cas9技术通常造成致死基因全身性敲除的首建鼠（F0代）无法出生或性成熟前死亡。研究方法:本研究开发了一种可传代繁育的致死基因全身性敲除小鼠模型的制备方法。（1）利用生物信息学系统设计构建致死基因CRISPR/Cas9系统元件;（2）将受精卵体外培养发育至二细胞期进行显微注射;（3）将注射后的二细胞进行胚胎移植,获得嵌合体首建鼠;（4）首建鼠实现传代繁育。对嵌合体首建鼠和后代鼠进行基因测序,均发现了敲除移码突变,成功的建立了致死基因全身性敲除小鼠模型系。结论:本研究综合运用分子克隆、显微操作、胚胎移植、分子测序、CRISPR/Cas9等技术方法,证实了利用CRIPR/Cas9技术,在胚胎的二细胞期进行显微注射的方法可以用于致死基因全身性敲出动物模型的构建。
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