兰科植物内生细菌生物学作用初步研究及花榈木微卫星引物开发

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qq407606015
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以黄色镰刀菌(Fusariumculmorum)、立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)、葡萄灰霉菌(Botrytiscinema)、小麦颖枯病菌(Septorianodorum)与番茄早疫病菌(Alternariasolani)为靶标,以从野生蕙兰和温室栽培蝴蝶兰中分离得到的51株内生细菌为研究材料,通过高通量筛选的方法,从中筛选出32株对于至少一种病原真菌有抑制作用的内生细菌,其中包括六株对于五种病原真菌都有抑制作用的内生细菌。从中挑选出有较强拮抗作用的内生细菌两株LC-1与LC-2,研究了产挥发性气体抑菌的情况,结果发现LC-1产生的挥发性气体对于立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)、葡萄灰霉菌(Botrytiscinema)有抑制作用,而LC-2产生的挥发性气体只对立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)有抑制作用。进一步研究LC-1的活性物质温度稳定性与生长曲线后发现,LC-1的拮抗活性与细菌的生长成正相关关系,在发酵26个小时后拮抗活性达到最大值,拮抗物质在121℃处理30分钟后依然保有40%以上的活性。用从蝴蝶兰根部分离的内生拮抗细菌LC-2处理蝴蝶兰组培苗后发现,其对于蝴蝶兰软腐病的抑制率到达60.9%。对蕙兰和蝴蝶兰内生细菌生物活性的初步研究表明:兰科植物特别是野生兰科植物中存在较多的活性微生物资源。   将花榈木(OrmosiahenryiPrain)基因组DNA用MseⅠ酶切后,连接上相应的接头,PCR扩增后回收500-1000bp片段与用生物素标记的微卫星探针(GA)12,(AAG)8杂交后,运用磁珠富集含有微卫星序列的DNA片段。将获得的序列经PCR扩增,连接载体pMD19-T,构建富含微卫星序列的小片段插入文库。用PCR法筛选文库,获得78个阳性克隆,经测序分析得到24个微卫星序列,成功设计出9对引物。
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