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超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase;EC 1.15.1.1;SOD)是广泛存在于生物体内的金属酶,是机体内唯一以超氧阴离子自由基(Oˉ<,2>)为底物的酶,它能专一地催化Oˉ<,2>的歧化反应,生成过氧化氢和氧气,能有效的抵御氧自由基和其他氧化物自由基对细胞质膜的毒性,对机体防御氧化损伤起着十分重要的作用.该研究成功构建了毕赤酵母(Pichiapastoris)胞内表达质粒pPICZA-sodM18,质粒线性化后通过电激法导入毕赤酵母GS115,Zeocin抗性梯度筛选得到高拷贝重组菌株.PCR鉴定及Mut表型分析进一步说明,目标基因已经重组到宿主菌基因组染色体上;0.5﹪甲醇诱导表达后,SDS-PAGE结果显示,表达的蛋白相对分子量约为23kD,活性电泳出现明显活性条带;酶活性测定显示,重组菌株SOD活性比对照提高5倍左右;氯仿-乙醇(3:5/V:V)和KCN(5mmol/L)抑制反应进一步证明,所表达的SOD为锰超氧化物歧化酶.结果表明来源于蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)的Mn-sod2基因在毕赤酵母中得到正确表达.成功构建了毕赤酵母(Pichiapastoris)分泌表达质粒pPICZoA-sodM18、pPICZαA-sodC,质粒线性化后通过电激法导入毕赤酵母GS115,Zeocin抗性梯度筛选得到高拷贝重组菌株.PCR鉴定进一步说明,目标基因已经重组到宿主基因组染色体上;0.5﹪甲醇诱导表达后,活性电泳出现明显活性条带,重组酵母发酵液中Mn-SOD的活性约是对照菌株SOD活性的2.6倍;CuZn-SOD酶活力约是对照菌株SOD活性的1.3倍.结果表明来源于蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)的Mn-sod2、CuZn-sod基因在毕赤酵母中得到一定量的分泌表达.该研究为SOD酶的工业化生产奠定了一定基础.