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患白斑综合症的斑节对虾，液氮速冻后存于-70℃冰箱备用，取感染WSBV12hr～74hr对虾的肌肉，冰上切碎，于TRIzol试剂中研磨混匀，加氯仿剧烈振摇后离心。水相加等体积异丙醇混匀后离心沉淀RNA。用无RNase水60℃溶解。用752-C型分光光度计分别测定总RNA在波长260nm和280nm的光密度值(O.D.值)。用Oligo(dT)-Cellulose过柱分离mRNA。mRNA反转录用ExpandTMReverseTranscriptase，SMARTⅢTM寡聚核苷酸，和CDSⅢ/3PCR引物于42℃温育1h。RT-PCR用5PCR引物，CDSⅢ/3PCR引物，和高级cDNA聚合酶混合物等，PCR仪上扩增后，于1.1％琼脂糖/EtBr凝胶上电泳检测。
cDNA的回收和纯化；RT-PCR产物于琼脂糖/EtBr凝胶电泳，在手提式长波长紫外灯下切下200bp-10kb的cDNA，用透析袋电泳法回收cDNA。用蛋白酶K45℃孵育，酚/氯仿/异戊醇抽提沉淀。SfiI酶切消化cDNA末端后，加入二甲苯青用CHROMASPIN-400柱收集cDNA。cDNA与TriplEx2TM载体连接；连接按cDNA末端的摩尔浓度，T4DNA连接酶于16℃温育过夜。适量包装提取物加入包装λ噬菌体DNA。噬菌体的转染：用LB/MgSO4/麦芽糖液体培养基，接种XL1-Blue单菌落培养过夜，离心后用10mMMgSO4重悬沉淀。用λ稀释缓冲液稀释包装产物。加入LB/MgSO4顶层培养基，平板倒置于37℃培养6-18hr。计算噬斑数目和噬菌体的滴度。计算重组噬斑和非重组噬斑的数目，用LB/MgSO4顶层培养基中分别加入X-gal和IPTG溶液。置于37℃培养6-18hr，直到噬斑和蓝色出现，计算重组噬斑和非重组噬斑的比率。
cDNA文库的扩增；用10mMMgSO4重悬沉淀的XL1-Blue菌，加入稀释好的噬菌体，铺LB/MgSO4顶层培养基，置于37℃培养6-18hr，直到噬斑生长完全。加入λ稀释缓冲液4℃过夜，收集稀释缓冲液离心后上清液于4℃保存。计算扩增文库的效价；取λ噬菌体裂解产物到λ稀释缓冲液做梯度稀释，加入LB/MgSO4顶层培养基置于37℃培养至少6-7hr。计算噬斑数目和扩增文库的效价(pfu/ml)。
cDNA文库的初步筛选；项层培养基加X-gal溶液、IPTG溶液和XL1-Blue过夜培养物及稀释的噬菌体，置于37℃培养6-18hr到噬斑和蓝色出现。用快速酚法粗筛，凝胶电泳检测。选出的阳性菌株，碱法提取λ噬菌体DNA，进行酶切鉴定。
探针制备及标记；病虾剪碎后在液氮下研磨，匀浆后差速离心，上清用微孔滤膜过滤后，再经4℃离心沉淀病毒，电镜下观察病毒纯度。用酚/氯仿/异戊醇抽提DNA。共制备4组探针用末端化学法标记地高辛；(1)WSBV基因组DNA，DNA片段大小为200bp～2kb。(2)WSBV基因组DNA中已测序片段。(3)已知?病毒p35片段的序列合成的寡核苷酸。(4)正常健康虾肌肉抽提的基因组DNA，作为阴性对照探针。
核酸探针杂交；于4℃使顶层琼脂糖变硬。将尼龙膜铺于顶层琼脂表面，使其直接与噬斑接触。印膜后变性，中和。用SSC浸泡后干燥，使DNA固定于尼龙膜上。2×SSC液体浸泡膜，预杂交42℃育2-4小时。标记探针变性后加入预杂交液中，杂交时间3～6hr时，尼龙膜用1×SSC含0.1％SDS溶液于68℃洗膜。用Buffer1洗膜和Buffer2洗膜30rmin，于室温与抗体结合30min。洗膜后加NBT溶液和X-磷酸盐置于暗处显色。目前用，WSBV基因组和E4＃探针已筛选出12个阳性克隆，现正在做进一步的复筛和酶切鉴定。