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微小RNA(microRNAs，miRNAs)在细胞增殖、生长发育、分化和凋亡等重要的生物学过程中均具有非常重要的作用，与肿瘤的发生具有紧密的相关性。近年来，众多关于宫颈癌的研究发现，miRNAs在正常宫颈组织与宫颈癌组织之间的表达存在显著的差异，并被推测与宫颈癌的发病和侵袭之间具有相关性。既往报道显示，miRNA143、miRNA34a、miRNA944、miRNA101、miRNA218、miRNA203、miRNA100、miRNA373和miRNA20a的表达异常均与宫颈癌的发生发展之间具有相关性，但这些报道均是针对某一miRNA展开研究，没有考虑不同miRNAs之间可能存在的相互作用。本研究采用实时定量PCR测定宫颈高级别病变及宫颈癌(CIN2+)与正常或慢性宫颈炎及CIN1级病变(＜CIN2)宫颈组织中miRNA143、miRNA34a、miRNA944、miRNA101、miRNA208、miRNA203、miRNA100、miRNA373和miRNA20a的相对表达量，通过单因素和多因素分析明确哪些miRNAs的表达异常是CIN2+的独立危险因素，并对鉴定为CIN2+独立危险因素的miRNAs与宫颈癌临床病理特征之间的相关性及其预测或诊断CIN2+的价值进行分析，以期为预测或诊断CIN2+提供新的分子生物标志物。 本课题包括以下两部分:第一部分:微小RNA与宫颈高级别病变及宫颈癌的相关性研究;第二部分:微小RNA与宫颈癌临床病理特征之间的相关性研究;第三部分:微小RNA预测或诊断宫颈高级别病变及宫颈癌的价值分析。 第一部分 微小RNA与宫颈高级别病变及宫颈癌的相关性研究 方法： 1.采用相对定量的方法，以U6RNA的Ct值作为内参照，通过荧光定量PCR测定CIN2+与＜CIN2宫颈组织中miRNA143、miRNA34a、miRNA944、miRNA101、miRNA218、miRNA203、miRNA100、miRNA373和miRNA20a的相对表达量，并通过加入等量的模板和采用相同的循环数对不同miRNAs的相对表达量进行标准化。 2.首先对结果进行单因素分析，然后将单因素分析中P＜0.1的因素纳入多因素分析，多因素分析采用二项分类Logistic回归模型，并使用向后逐步法筛选进入模型的自变量。以P＜0.05视为差异具有统计学意义。 结果： 宫颈组织中miRNA143的相对表达量＜0.76、miRNA34a的相对表达量＜0.64、miRNA101的相对表达量＜1.25、miRNA218的相对表达量＜0.59和miRNA203的相对表达量＜0.99是CIN2+的独立危险因素;宫颈组织中miRNA373的相对表达量≥0.54和miRNA20a的相对表达量≥1.74是CIN2+的独立危险因素。 第二部分 微小RNA与宫颈癌临床病理特征之间的相关性 方法： 分别以宫颈鳞状上皮细胞癌(SCC)淋巴结转移与否、浸润深度（侵及浆膜或未侵及浆膜）、分化程度（高、中分化或低分化）和TNM分期（Ⅰ、Ⅱ期或Ⅲ、Ⅳ期）为应变量，以宫颈癌组织中miRNA143、miRNA34a、miRNA101、miRNA218、miRNA203、miRNA373和miRNA20a的相对表达量为自变量进行多因素分析，多因素分析采用二项分类Logistic回归模型，并使用向后逐步法筛选进入模型的自变量。以P＜0.05视为差异具有统计学意义。 结果： miRNA34a的相对表达量＜0.64、miRNA101的相对表达量＜1.25、miRNA218的相对表达量＜0.59和miRNA203的相对表达量＜0.99是SCC发生淋巴结转移的危险因素;miRNA143的相对表达量＜0.76、miRNA34a的相对表达量＜0.64和miRNA218的相对表达量＜0.59是SCC侵及浆膜的危险因素;miRNA101的相对表达量＜1.25是SCC低分化的危险因素;miRNA143、miRNA34a、miRNA101、miRNA218、miRNA203、miRNA373和miRNA20a的相对表达量与TNM分期无关。 第三部分 微小RNA预测或诊断宫颈高级别病变及宫颈癌的价值分析 方法： 通过诊断试验评价与接收者工作特征曲线来分析miRNA143、miRNA34a、miRNA101、miRNA218、miRNA203、miRNA373和miRNA20a预测或诊断CIN2+的价值，计算诊断试验的特异度、灵敏度、正确率、约登指数、假阳性率、假阴性率、阳性似然比、阴性似然比、阳性预测价值和阴性预测价值，并计算其ROC曲线下面积。 结果： 1.通过宫颈组织中单一微小RNA的相对表达量预测或诊断CIN2+时，miRNA34a、miRNA203、miRNA373和miRNA20a预测或诊断CIN2+的ROC曲线下面积均超过0.700，诊断价值可达中等或以上，其中miRNA203预测或诊断CIN2+的ROC曲线下面积达到0.800以上，其灵敏度达90.83％，正确率达82.92％，阴性预测价值达89.11％。miRNA143、miRNA101和miRNA218预测或诊断CIN2+的价值较低，其ROC曲线下面积均不到0.700; 2.通过宫颈组织中多个微小RNA的联合来预测或诊断CIN2+的价值相比单个微小RNA预测或诊断CIN2+的价值均有所提高，其中除了miRNA34a和miRNA20a的联合预测或诊断CIN2+的ROC曲线下面积为0.796外，其余的ROC曲线下面积均大于等于0.800，尤其是miRNA203和miRNA373的联合预测或诊断CIN2+的ROC曲线下面积达到了0.871，其灵敏度达84.17％，特异度达90.00％，正确率达87.08％，假阳性率达10.62％，假阴性率为14.96％，阳性预测价值达89.38％，阴性预测价值达85.04％。 结论： 1.宫颈组织中miRNA143的相对表达量＜0.76、miRNA34a的相对表达量＜0.64、miRNA101的相对表达量＜1.25、miRNA218的相对表达量＜0.59和miRNA203的相对表达量＜0.99是CIN2+的独立危险因素;宫颈组织中miRNA373的相对表达量≥0.54和miRNA20a的相对表达量≥1.74是CIN2+的独立危险因素。 2.miRNA34a的相对表达量＜0.64、miRNA101的相对表达量＜1.25、miRNA218的相对表达量＜0.59和miRNA203的相对表达量＜0.99是SCC发生淋巴结转移的危险因素;miRNA143的相对表达量＜0.76、miRNA34a的相对表达量＜0.64和miRNA218的相对表达量＜0.59是SCC侵及浆膜的危险因素;miRNA101的相对表达量＜1.25是SCC低分化的危险因素;miRNA143、miRNA34a、miRNA101、miRNA218、miRNA203、miRNA373和miRNA20a的相对表达量与TNM分期无关。 3.单用miRNA203，miRNA203和miRNA373联合，miRNA34a和miRNA203联合，miRNA34a和miRNA373联合，miRNA34a、miRNA203和miRNA373联合，miRNA34a、miRNA203和miRNA20a联合，miRNA203、miRNA373和miRNA20a联合，miRNA34a、miRNA203、miRNA373和miRNA20a联合预测或诊断CIN2+的价值较高，临床应用前景较好。 4.单用miRNA373、单用miRNA34a、单用miRNA20a、miRNA34a和miRNA20a联合、miRNA203和miRNA20a联合、miRNA373和miRNA20a预测或诊断CIN2+的价值中等，具有一定的临床应用潜力。