【摘 要】
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近年来，越来越多的证据显示microRNAs(miRNAs)在固有免疫调控方面扮演了重要角色。下调的miRNA分子和多种疾病有关，如:癌症，炎症反应和免疫失调。靶基因预测分析显示了至少一半
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近年来，越来越多的证据显示microRNAs(miRNAs)在固有免疫调控方面扮演了重要角色。下调的miRNA分子和多种疾病有关，如:癌症，炎症反应和免疫失调。靶基因预测分析显示了至少一半以上固有免疫基因受到miRNAs的直接调控，但是miRNA调控固有免疫的分子机制还具有其探讨性。本研究利用模式动物秀丽线虫为研究对象，在81种miRNA突变体的基础上，通过在感染绿脓杆菌Pseudomonasaeruginosa(PA14)这种常见致病菌后的免疫情况来筛选出与秀丽线虫固有免疫相关的microRNA。 将同步化后到达L4时期的秀丽线虫转移到含有绿脓杆菌(PA14)的琼脂培养基上，于25℃培养箱中培养进行实验。利用一些指标如寿命长短，秀丽线虫体内抗菌肽变化情况等来初筛对秀丽线虫固有免疫有影响的microRNA，再利用双突变等试验方法来研究筛选出的miRNA与已知固有免疫信号通路的关系来进行探讨。 研究结果显示:从已有的的81种microRNA突变体秀丽线虫中初筛出了24种表现出抗性的miRNA突变体秀丽线虫和11种表现出敏感的miRNA突变体秀丽线虫，表明这35种miRNA可能与秀丽线虫固有免疫相关。接下来发现这35种miRNA突变体秀丽线虫中有7种参与调控秀丽线虫的寿命。RT-PCR显示初筛后表现出抗性的miRNA突变体秀丽线虫let-7(n2853)，mir-45(n4280)，mir-60(n4974)，mir-79(n4126)，mir-84(n4037)，mir-355(n4618)在感染绿脓杆菌后体内抗菌肽显著上调表达。RT-PCR也显示初筛后从表现出敏感的miRNA突变体秀丽线虫mir-70(n4109)，mir-73&74(ndf47)，mir-85(n4117)，mir-233(n4761)，mir-360(n4635)在感染绿脓杆菌后体内抗菌肽显著下调表达。同时RT-PCR分析了突变体秀丽线虫let-7(n2853),mir-60(n4974),mir-79(n4126),mir-84(n4037),mir-355(n4618), mir-73&74(ndf47)，mir-233(n4761)与已知免疫信号通路之中主要基因，发现这些miRNAs在一定程度上参与调控了这些免疫基因，推测这些miRNAs也参与调控了已知的固有免疫信号通路。接下来突变体秀丽线虫mir-60(n4974)和mir-233(n4761)与p38 MAPK免疫信号通路、Toll样免疫信号通路(Toll-like)、TGF-β免疫信号通路、胰岛素免疫信号通路(Insulin signaling)这四种免疫信号通路中的关键基因pmk-1、tol-1、dbl-1、daf-16进行双突变实验，实验结果表明突变体秀丽线虫由于缺乏mir-60在绿脓杆菌侵染时表现出的抗性表型被恢复到野生型水平;而突变体秀丽由于缺乏mir-233在绿脓杆菌侵染时表现出的敏感表型被放大。 总之，本实验证明了microRNA分子确实参与了秀丽线虫固有免疫调控，鉴定了可能参与固有免疫的可能miRNA遗传位点，且这些遗传位点与已知保守信号通路之间存在特定的遗传相互关系。
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