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口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease virus，FMDV)引起的一种急性、热性和高接触性传染病。常发于以猪、牛、羊等经济动物为主的偶蹄兽。口蹄疫传播速度快，覆盖范围广，发病率高，加之血清型繁多，病毒易变种，给疫病防治增加了难度，一旦爆发将给畜牧业、农业及至世界经济都带来毁灭性的损失，是一种重要的经济政治病。口蹄疫最主要的防治措施是接种疫苗。在我国，口蹄疫是国家动物疫病强制免疫计划中的疫病之一。目前，生产实践中使用的猪口蹄疫疫苗主要为添加油佐剂的灭活疫苗。其存在免疫保护率欠佳;机体内降解吸收慢，残留时间长，影响肉品外观;粘度大，注射麻烦等弊端。因此，研制安全、高效、新型的猪口蹄疫疫苗佐剂是当前兽医科技工作者所面临的重大挑战和亟待解决的问题。合欢皮皂苷(Albizzia julibrissin saponin，AJS)系中药合欢皮中筛选得到的佐剂活性皂苷有效部位。本实验室前期研究结果表明:AJS对卵清蛋白(Ovalbumin，OVA)、禽流感鸡痘病毒载体活疫苗(rFPV-HA)和禽流感-新城疫重组二联活疫苗(rL-H5)等均具有显著的佐剂作用，是一种理想的疫苗候选佐剂。本实验以小鼠为实验动物，评价AJS对猪O型口蹄疫灭活疫苗(Swine Type-O Foot-and-Mouth DiseaseInactivated Aqueous Vaccine，FMDV-W)的佐剂作用，并初步探索了AJS发挥佐剂作用的先天性免疫机制，为其进一步临床试验研究提供科学依据。 1.AJS对猪O型口蹄疫灭活疫苗的佐剂作用以ICR小鼠为实验动物，铝胶和Quil A为对照，FMDV-W单独或联合不同剂量的AJS皮下注射免疫小鼠，间隔两周加强免疫，二免后两周分离血清、制备脾脏单细胞悬液。采用正向间接血凝试验(Indirect Hemagglutination Assay, IHA)和间接ELISA检测受免小鼠血清中FMDV特异性IHA抗体滴度，以及FMDV特异性IgG总抗体及其亚类IgG1、IgG2a和IgG2b抗体效价;MTT法测定ConA和LPS刺激受免小鼠脾细胞增殖反应、自然杀伤细胞(Nature Killer)活性;ELISA试剂盒检测脾细胞培养上清中细胞因子IFN-γ和IL-10含量。结果表明:AJS可显著增强ConA和LPS诱导的FMDV-W受免小鼠脾细胞增殖反应(P＜0.05或P＜0.001)和NK细胞的杀伤活性(P＜0.05或P＜0.01);提高FMDV-W受免小鼠血清中FMDV特异性IHA抗体滴度(P＜0.01或P＜0.001)、FMDV特异性IgG、IgG1、IgG2a和IgG2b抗体效价(P＜0.001)。AJS能促进FMDV-W受免小鼠脾细胞分泌IFN-γ(P＜0.001)，降低IL-10产生(P＜0.001或P＜0.05)。这些结果说明:AJS不仅能增强FMDV-W受免小鼠对FMDV-W的体液免疫和细胞免疫反应，且可同时诱导FMDV-W免疫小鼠产生Th1/Th2免疫应答，对FMDV-W具有显著的佐剂作用。 2.AJS对猪O型口蹄疫灭活疫苗佐剂作用机制初步探究以BALB/c小鼠为实验动物，铝胶(Alum)为对照，FMDV-W单独或联合AJS皮下注射免疫小鼠，于注射后12h、24 h和48h，分离脾脏和腹股沟淋巴结，制备单细胞悬液，经荧光标记特异性抗体染色，采用流式细胞仪检测脾脏和淋巴结中免疫细胞的数量变化以及树突状细胞(DCs)的表型。结果表明:与FMDV-W单独注射组比较，AJS可显著提高FMDV-W免疫小鼠脾指数和引流淋巴结指数(P＜0.001)，增加腹股沟淋巴结中免疫细胞，尤其是单核细胞、中性粒细胞、树突状细胞和巨噬细胞的数量，说明AJS可促进免疫细胞向淋巴结迁移。AJS亦能显著上调脾脏DCs表面分子CD80和MHC-Ⅱ的表达水平，说明AJS可促进脾脏树突状细胞的活化和成熟。 综上所述，AJS可通过促进先天性免疫细胞迁移到引流淋巴结，以及脾脏DCs活化和成熟，发挥对FMDV-W的佐剂作用，为AJS作为猪口蹄疫疫苗的佐剂开发研究提供了科学依据。