毛细管区带电泳法分离多种低分子量有机酸的研究

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本文运用毛细管区带电泳直接紫外检测技术分离九种低分子量有机酸,尝试建立一种简单、高效、准确、稳定地测定低分子量有机酸成分及含量的方法。通过对缓冲液种类、PH值、缓冲液浓度、电渗改性剂、有机溶剂、温度,电压等电泳条件优化,确定毛细管区带电泳直接紫外检测分离低分子量有机酸的优化条件如下:未涂层的毛细管50μm×60cm(有效分离长度50 cm);分离温度30℃;分离电压:12kv;电极:反向;检测波长:200nm;缓冲液:230 mmol·L-1NaH2PO4/115mmol·L-1NazB4O7缓冲溶液(摩尔比2:1,PH7.49),内含电渗流改性剂十四烷基三甲基溴化铵(TTAB,0.5 mmol·L-1),二次进样之间用运行缓冲液冲洗4min。溶液进样前用0.45μm的纤维滤膜过滤。在此条件下,甲酸、乙酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、酒石酸、乳酸、富马酸和丁二酸9种有机酸均能达到基线分离,分离度均大于1.6。且九种有机酸的线性范围较宽,相关系数在0.9990~0.9999之间,线性关系良好;各有机酸迁移时间及峰面积的RSD分别在0.1%~0.2%及2.0‰6.0%之间,回收率在94.7%~104.2%,方法具有较好的精密度和准确度。   将优化的检测方法应用于实际体系,检测丁二酸发酵体系中有机酸组份的回收率在95%~102.5%之间;对样品平行测定五份,有机酸含量RSD均2%~12%之间,说明方法具有良好的准确度和重现性,另外对整个发酵过程进行了跟踪监测,丁二酸在发酵14小时后已积累11g/L。   将优化检测方法应用于葡萄酒样品的测定,有机酸回收率在91.9%~116.9%之间,回收率的RSD在2.0%~6.5%之间。并对三种不同种葡萄酒进行分析,发现不同品质的葡萄酒中有机酸含量差别较大。   本文通过研究,建立了毛管区带电泳直接测定九种低分子量有机酸的新方法,经验证该方法适用于丁二酸发酵过程的有机酸监测,适用于葡萄酒酿造的工艺控制、产品质量控制。
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