论文部分内容阅读
本研究采用RACE技术首次成功克隆得到了As-rbbp4 cDNA全长(基因序列号:AKG51637.1)，其长度为1411bp，其中包括1281bp的开放阅读框，63bp的5UTR以及67bp的3-UTR。SMART软件在线预测其此属于WD40家族，最主要的特点是含有7个WD重复序列。利用TMHMM2.0软件预测此蛋白无跨膜结构。PSORTII软件预测As-RBBP4主要定位于细胞核中。包含24个磷酸化位点，其中丝氨酸位点16个，苏氨酸位点3个，酪氨酸位点5个。预测无信号肽，说明此蛋白为亲水性非分泌性蛋白。多序列比对分析显示As-RBBP4与其它16个物种的蛋白相似度高达83％，尤其是在WD40结构域，为高度保守蛋白。进化树分析As-RBBP4位于高等脊椎动物和低等无脊椎动物之间，符合其进化地位。原位杂交结果显示，As-rbbp4在中国卤虫滞育解除后胚胎发育的各个时期的表达部位均不存在组织或器官的特异性。实时荧光定量PCR及免疫印迹试验分别从基因和蛋白双重水平上对RBBP4的表达量进行分析，结果显示当中国卤虫发育至10h时，表达量达到峰值，并随着中国卤虫的发育而逐渐降低;同时，高盐、低温胁迫实验结果显示As-RBBP4在应对高盐、低温的刺激下的表达水平均呈现上调趋势，并且盐度越高、温度越低，表达量越高。相关周期蛋白As-E2F1，As-CyclinE呈现出与As-RBBP4相类似的趋势。 该研究分析了RBBP4在中国卤虫早期胚胎发育过程中的表达模式，从而阐述了RBBP4在中国卤虫发育阶段对细胞周期的调控及在卤虫滞育胚胎重新启动过程中的作用。