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他莫昔芬（tamoxifen，TAM）是目前广泛用于雌激素受体（ER）阳性的乳腺癌患者的预防和治疗的固醇类抗雌激素药物。由于他莫昔芬个体间生物利用度差异较大，而且有报告指出其对患者具有明显的副作用，给临床个体化用药带来较大困难。尤其是不同个体在口服相同剂量的他莫昔芬后，血药浓度的差异非常大，这提示其主要药物代谢基因CYP3A5和CYP2D6基因型的差异可能是其血药浓度的影响因素之一。CYP2E1酶主要参与激活小分子致癌物如苯、四氯化碳和亚硝胺等，同时参与酒精的氧化代谢和产生自由基而启动脂质过氧化，所以，乳腺癌易感性与CYP2E1基因型的相关性也具有一定的研究意义。
本课题的目的在于采用聚合酶链式反应方法（PCR）对人体细胞色素P450酶系的CYP3A5*3、CYP2D6*10位点进行基因分型，并应用高效液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)方法测定乳腺癌患者体内他莫昔芬及其活性代谢物4-羟基他莫昔芬（4-hydroxytamoxifen，HTAM）的血药浓度,再采用统计学方法分别分析各种基因型对他莫昔芬血药浓度的影响，为临床合理个体化用药提供理论依据。并在健康人群中和乳腺癌患者中分别测定CYP2E1基因型，从而探讨CYP2E1基因多态性与乳腺癌易感性之间的关系。
第一部分：CYP3A5*3、CYP2D6*10基因型测定的方法学研究
目的: 建立测定乳腺癌患者的CYP3A5*3和CYP2D6*10的基因多态性的方法。
研究方法:采用苯酚-氯仿法对30例乳腺癌患者的血液标本进行基因组DNA的提取，并用PCR方法对基因组DNA标本进行基因检测，再通过凝胶电泳实验进行基因分型。
结果: 30例乳腺癌患者中，CYP3A5基因型*1/*1型1例、*1/*3型13例、*3/*3型16例，CYP2D6基因型*1/*1型2例、*1/*10型18例、*10/*10型10例。
结论: 本研究建立的测定乳腺癌患者的CYP3A5*3、CYP2D6/*10基因型的方法是稳定、特异的。
第二部分：他莫昔芬及4-羟基他莫昔芬血药浓度测定的方法学研究
目的: 建立测定他莫昔芬及其活性代谢物4-羟基他莫昔芬血药浓度的方法。
研究方法: 采集30例乳腺癌患者空腹服药10mg、2h后的血浆标本，对血浆标本进行萃取，采用内标法并应用高效液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)方法，测定他莫昔芬（TAM）及其活性代谢物4-羟基他莫昔芬（HTAM）的血药浓度。
结果: 血浆中TAM和HTAM浓度分别在10～500 ng/mL，1～50ng/mL范围内线性关系良好；TAM和HTAM的回收率分别在85.6±4.8～102.9±5.0和86.6±0.6～103.8±9.6之间，CV分别3.9％～13.0％和0.9％～10.2 ％之间。
结论:本研究建立的测定他莫昔芬及其活性代谢物4-羟基他莫昔芬血药浓度的方法是稳定、快捷、有效的。
第三部分：CYP3A5和CYP2D6基因多态性与他莫昔芬及其活性代谢物4-羟基他莫昔芬血药浓度的相关性研究
目的: 研究CYP3A5和CYP2D6基因多态性对乳腺癌患者体内他莫昔芬及其活性代谢物4-羟基他莫昔芬血药浓度的影响。
研究方法:采用PCR方法测定CYP3A5和CYP2D6基因型，采用高效液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)方法测定TAM和HTAM的血药浓度，使用统计学方法比较其相关性。
结果: 30例乳腺癌患者血浆中TAM和HTAM浓度分别在94.4～391 ng/mL和1.11～3.9ng/mL之间。CYP3A5基因型与乳腺癌患者体内TAM的浓度差异具有统计学意义，比较发现*1/*1和*1/*3组的TAM的浓度值（132.74±28.33）明显低于*3/*3组（220.18±61.54）（P<0.01），CYP2D6基因型与其活性代谢物HTAM的浓度差异具有统计学意义，三组之间两两比较发现*1/*1和*1/*10两组HTAM的浓度值（3.56±1.55，2.57±0.87）都明显高于*10/*10组（1.91±0.46）（P<0.01），但*1/*1组和*1/*10组之间HTAM的浓度值差异没有显著性（P>0.05）。
结论: 乳腺癌患者的CYP3A5和CYP2D6基因型影响他莫昔芬的体内代谢，相关基因型的测定可以为他莫昔芬个体化合理用药提供参考。
第四部分：CYP2E1基因多态性和乳腺癌易感性的相关性研究
目的：研究CYP2E1基因多态性与乳腺癌易感性的关系。
研究方法：对乳腺癌女性患者23例，健康对照人群105例（男性54例，女性51例）进行病例对照研究，应用PCR-RFLP方法检测其CYP2E1基因型及等位基因频率并进行比较。
结果：CYP2E1基因型分布与乳腺癌易感性有关(P<0.05)，c2/c2基因型携带者换乳腺癌危险度是其他基因型携带着的2.95倍(95％ confidence interval=0.78～11.07; P=0.09)。
结论：CYP2E1基因多态性与乳腺癌易感性有关,与性别无关。