【摘 要】
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目的:通过双分子荧光互补技术、转染技术和双荧光素酶检测系统，探讨转录因子Olig1、Olig2与Id2、Id4在MBP转录调节过程中的作用。方法：（1）应用大鼠转录因子Olig1及Olig2的慢病毒
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目的:通过双分子荧光互补技术、转染技术和双荧光素酶检测系统，探讨转录因子Olig1、Olig2与Id2、Id4在MBP转录调节过程中的作用。方法：（1）应用大鼠转录因子Olig1及Olig2的慢病毒载体pLenti6.3-Olig1-RFP，pLenti6.3-Olig2-GFP包装得到的病毒颗粒感染人胆囊癌GBC-SD细胞株，抗生素Blasticidin筛选出稳定表达大鼠转录因子Olig1及Olig2的人胆囊癌GBC-SD细胞株，免疫印迹法验证大鼠Olig1及Olig2的蛋白表达。（2）PCR克隆扩增大鼠MBP启动序列，构建MBP启动序列PGL3-basic荧光素酶报告载体，酶切测序鉴定。（3）应用pBiFC-VN173-Olig1、pBiFC-VN173-Olig2、pBiFC-VC155-Id2的BiFC真核表达载体，选择相应的两载体共转染入人胆囊癌GBC-SD细胞株，荧光显微镜下观察转录因子Olig1、Olig2与Id2之间的相互作用；应用脂质体法将大鼠MBP启动序列PGL3-basic荧光素酶载体与大鼠转录因子Id2、Id4的BiFC真核表达载体分别或共转染至稳定表达大鼠Olig1和Olig2的人GBC-SD细胞或不表达Olig1和Olig2的人GBC-SD细胞，通过检测荧光素酶相对活性，分析Olig1、Olig2与Id2、Id4在MBP转录调控中的作用。结果：（1）成功获取稳定表达大鼠转录因子Olig1及Olig2的人GBC-SD细胞，免疫印迹法显示大鼠Olig1及Olig2蛋白高表达；（2）克隆出大鼠MBP启动序列，成功构建PGL3-basic-MBP启动序列荧光报告载体；（3）Olig1、Olig2与Id2的BiFC真核载体在靶细胞中能够高效表达，并可以相互结合出现BiFC荧光信号；双荧光素酶检测系统显示，在稳定表达大鼠Olig1、Olig2的GBC-SD细胞各个转染组中，与阴性对照组相比，大鼠PGL3-basic-MBP启动序列荧光素酶报告载体转染组的相对荧光素酶活性明显增高(p<0.01)；而大鼠Id2、Id4BiFC真核表达载体及大鼠PGL3-basic-MBP启动序列荧光素酶报告载体共转染组的荧光素酶相对活性较阴性对照增高(p<0.01)，但较上组明显降低(p<0.01)。结论：转录因子Olig1及Olig2能够有效地正性调节MBP启动序列，转录因子Id2、Id4通过与Olig1及Olig2直接结合抑制它们对MBP启动序列的调节作用。
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