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梅毒是由苍白密螺旋体(Treponema pallidum, TP)感染引起的一种性传播疾病,传染性极高。近年来,我国梅毒的发病率不断上升,危害极大,特别是对临床输血构成了严重的威胁。血液样本的安全与否直接影响到人们的健康问题。因此,对于梅毒的预防及其早期诊断工作显得尤为重要。目前,国内实验室多数用操作简单、成本低廉的非特异性梅毒螺旋体血清学试验,如快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)、性病研究实验室试验(VDRL)等对梅毒进行常规筛选。对于梅毒的确认实验则采用特异性梅毒螺旋体抗体血清学试验,包括梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)等。随着科学技术的不断进步,尤其是基因工程生产TP重组抗原技术的进步,极大地推动了梅毒检测方法的发展。酶联免疫吸附实验(ELISA),即以TP重组抗原包被酶标板,双抗原夹心显色法检测梅毒螺旋体抗体已成为目前国内通用的诊断方法,但该方法灵敏度仍有待于进一步提高。高灵敏度化学发光技术的推广应用,特别是与磁性微粒联用建立的化学发光磁酶免疫分析法(Magnetic Enzyme Chemiluminescence Immunoassay, MECLIA)更大程度提高了检测方法的灵敏度,并且该方法容易实现自动化,发展前景很好,值得大力推广。本研究是以新型磁性复合微粒,即本课题组自主研发的金磁微粒GoldMag(?)(Fe304／Au磁粒)为固相载体,包被梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原(TP15、TP17、TP44.5、TP47),加入对照血清样本和辣根过氧化物酶标记的TP抗原(HRP-TP15、HRP-TP17、HRP-TP44.5、HRP-TP47),于37℃,180 rpm,温育反应30 min,待形成抗原-抗体-酶标抗原双抗原夹心复合物后,加入辣根过氧化物酶化学发光底物鲁米诺(1×10-3mol／L)、过氧化氢(1×10-3mL／L)及增强剂对碘苯酚(3×10-3mol／L),通过化学发光检测仪捕捉发光信号,实现对血清中梅毒螺旋体抗体的高灵敏检测。首先对该方法中各个反应条件进行优化,确定最佳工作条件,然后对建立的化学发光磁酶免疫分析法检测梅毒螺旋体抗体方法进行评价,并与其它市售试剂盒进行了比较研究。磁性复合微粒高效快捷的分离技术结合化学发光检测线性范围宽、灵敏度高的特点,使得建立的检测方法呈现很好的结果。方阵实验最终确定TP抗原包被量在7μg／mg(210 ng／孔),酶标抗原稀释浓度在1：3000,此外,确定HRP标记抗原稀释液为PBST+1%BSA,血清样本稀释液为PBS+0.1%BSA；稳定性实验结果表明试剂中添加0.05％Proclin300的保护剂,能够有效增加试剂稳定性；最后对该方法进行比较全面的评价,结果表明,4℃与37℃放置6天的试剂,检测结果相当,稳定性很好；批内差(2.86%～5%)和批间差(5.1%～9.7%)均较小,并且通过对质控品抗-TP标准物质重复10次检测,变异系数为5.42%,均达到了国家标准；建立TP抗体浓度与发光强度之间的标准曲线,结果表明在0.25-4 NCU／mL范围内线性关系良好,R2=0.9980；同时该方法特异性良好,检测80例TP抗体阴性血清、20例乙肝阳性血清(TP阴性)及20例丙肝阳性血清(TP阴性),阴性符合率均达到100%；通过与商品化化学发光试剂盒对比,灵敏度可提高4倍。实验结果表明,以金磁微粒为固相载体建立的化学发光磁酶免疫分析法检测梅毒螺旋体抗体有着很高的灵敏度、很好的特异性及良好的线性范围,各项评价指标均可达到国家相关要求,因此,其有着很好的应用前景,有望在医院、血站及其他临床检测领域普及应用。