锦紫苏类病毒的遗传变异及其与寄主之间的关系

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:cxycsnf
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类病毒本身不编码任何蛋白,而是完全依靠寄主的相关酶类进行自我复制。锦紫苏是世界范围内广泛种植的一种观赏植物,原产于印度尼西亚,其茎叶繁茂,鲜嫩多汁。锦紫苏极其容易受到马铃薯类病毒科锦紫苏类病毒属内各种类病毒的侵染。目前为止,世界上共发现了6种侵染锦紫苏的类病毒,分别为:锦紫苏类病毒-1~6(CbVd-1~CbVd-6)。锦紫苏类病毒侵染锦紫苏后在某些品种上可能呈潜伏侵染,不引起任何的症状,也可能会在某些品种上引起植株矮化或叶片轻度萎黄等症状。所有已发现的锦紫苏类病毒具有共同的中央保守区序列,而且锦紫苏类病毒具有广泛重组的特性。虽然CbVd-1已被证明广泛存在于世界各国,但其他五种锦紫苏类病毒的相关信息却十分有限,特别是CbVd-5和CbVd-6,目前还没有关于这两种类病毒生物学方面的报道。本研究意在建立两种锦紫苏类病毒快速检测方法,调查锦紫苏类病毒在全国范围内的发生和分布情况,并对其遗传多样性进行分析,探讨锦紫苏类病毒序列变异和寄主植物品种之间的关系。本研究中得到的锦紫苏类病毒序列将丰富GenBank数据库中类病毒序列相关信息,本研究的结果也将为锦紫苏类病毒重组及致病机制的阐明打下良好的理论基础。根据所有锦紫苏类病毒具有共同的中央保守区这一特性,本研究建立了两种锦紫苏类病毒快速检测方法,分别为Sap-direct RT-PCR法和通用探针快速杂交法。Sap-direct RT-PCR法中,利用移液器直接吸取锦紫苏茎和叶的汁液作为RT-PCR的模板,根据锦紫苏类病毒中央保守区序列设计可以扩增所有锦紫苏类病毒的通用引物,通过一次PCR就可以确定被检植株是否感染了锦紫苏类病毒以及感染类病毒的种类。通用探针快速杂交法中,将锦紫苏类病毒中央保守区上游的32个相同的核苷酸序列扩增8倍后用于制备检测所有锦紫苏类病毒的通用探针—8CCR探针。该探针可以通过斑点杂交一次性确定样品中是否携带锦紫苏类病毒,通过Northern杂交技术可以一次性确定样品中感染锦紫苏类病毒的种类。这两种快速检测方法简单高效,成本较低,适用于锦紫苏类病毒的批量检测及大规模调查,对其他类病毒,甚至病毒快速检测方法的建立也具有借鉴意义。锦紫苏类病毒疫情普查研究中,从中国、印度及印度尼西亚共采集888个锦紫苏样品。检测结果表明:CbVd-1和CbVd-5广泛存在于这三个国家中;CbVd-2,CbVd-3和CbVd-6仅在中国样品中检测到;所有的样品中均没有检测到CbVd-4。本研究结果是CbVd-1和CbVd-5在印度尼西亚的首次报道,CbVd-2和CbVd-3在中国的首次报道,也是CbVd-5在印度的首次报道。锦紫苏类病毒生物学活性研究中,利用侵染性克隆技术,首次确认了CbVd-1、CbVd-3、CbVd-5和CbVd-6中国地区分离物的生物学活性。研究结果表明:不同锦紫苏类病毒在同一种寄主植物中的侵染时间从45天到300天不等,确认了CbVd-5和CbVd-6的生物学活性,为其分类地位的确立提供了确凿的分子生物学证据。子代序列分析结果表明:锦紫苏类病毒的遗传多样性不仅与寄主的种类有关,也与类病毒自身的种类有关。另外,本研究还确认了CbVd-5和CbVd-6可以通过种子进行传播。
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