【摘 要】
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目的：构建全人源抗结肠癌噬菌体单链抗体库，从中筛选抗结肠癌单链抗体(ScFv)，并对其进行特异性鉴定。
方法：采用体外致敏法和EBV转化技术联合噬菌体展示技术构建噬菌体呈现
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目的：构建全人源抗结肠癌噬菌体单链抗体库，从中筛选抗结肠癌单链抗体(ScFv)，并对其进行特异性鉴定。
方法：采用体外致敏法和EBV转化技术联合噬菌体展示技术构建噬菌体呈现型单链抗体库。筛选获得的阳性克隆进行ELISA及免疫组化鉴定并测序。
结果：ScFv基因克隆入噬菌体载体后，转化大肠杆菌MC1061，得到库容为4.0×109的初级噬菌体抗体库，全长ScFv基因的插入率为90％。对抗体库进行3轮正负淘选和富集后，随机挑取3000个克隆进行ELISA，发现2个克隆对HT-29呈强阳性反应，而与HFF等人正常细胞系呈弱阳性或阴性反应。免疫组织化学鉴定表明克隆F12与结肠癌组织和结肠癌旁组织阳性率有差别，用Fisher确切概率法分析显示差别有统计学意义(P＜0.0001)。
结论：构建了库容量达4.0×109的全人源抗结肠癌噬菌体单链抗体库，通过淘选富集、ELISA和免疫组织化学鉴定获得特异性较强的噬菌体克隆，为结肠癌的临床导向诊断和治疗奠定了基础。
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