【摘 要】
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目的:观察用3-MA(3-methlyadenine,3-MA,3-甲基腺嘌呤)作用的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)在大鼠深静脉血栓中的增殖情况,为慢性深静脉血栓的治疗提供一种
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目的:观察用3-MA(3-methlyadenine,3-MA,3-甲基腺嘌呤)作用的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)在大鼠深静脉血栓中的增殖情况,为慢性深静脉血栓的治疗提供一种新的思路。方法:1.Ficoll法分离Wistar大鼠的骨髓单个核细胞(bone marrow-derived mononuclear cells,BMMNCs),EGM-2MV培养基诱导、培养、扩增骨髓源性EPCs并鉴定。倒置显微镜观察、MTT法检测EPCs增殖情况。2.结扎大鼠肾下段下腔静脉建立深静脉血栓模型,随机分成四组,每组15只。3.分组。A组:空白对照组,注射1ml培养基;B组:注射1ml含有105个EPCs的细胞悬液;C组:注射1ml浓度为5mmol/L的3-MA; D组:注射1ml含有105个EPCs的细胞悬液,注射前EPCs与5mmol/L的3-MA混合培养6h。4.应用Western blot检测第14天各组血栓内自噬微管相关蛋白LC3Ⅱ、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的蛋白表达。5.采用SPSS17.0软件进行分析。结果:1.Ficoll法分离的大鼠骨髓单个核细胞,经EGM-2MV培养基培养可在体外诱导分化为EPCs。2.下腔静脉血栓模型构建成功,肾下段下腔静脉结扎法构建血栓模型成功率高。3. Western blot结果显示:①A、B、C、D四组LC3Ⅱ蛋白均有表达,C组、D组较A组、B组明显下调(P<0.05);B组和A组、D组和C组之间差异无统计学意义。②A、B、C、D四组VEGF蛋白均表达,B组和D组较A组和C组表达明显上调,D组蛋白表达较B组高(P<0.05);C组和A组之间差异无统计学意义。③A、B、C、D四组bFGF蛋白,B组和D组较A组和C组表达明显上调,D组蛋白表达均较B组高(P<0.05);C组和A组之间差异无统计学意义。结论将3-MA作用的EPCs移植到血栓模型后,EPCs的增殖能力提高,较单纯的EPCs移植具有更强的增殖能力。
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