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中国卤虫(Artemia sinica)是一种广温、广布的小型甲壳动物,以卵生或卵胎生的方式进行繁殖。在外界环境胁迫的条件下,中国卤虫以产卵的繁殖方式可以产下休眠卵,这种休眠卵是处于滞育期的原肠胚,滞育胚胎对抵抗不利环境、扩大种群繁殖有重要意义。糖原在动物体内,除了作为能量贮备外,还参与许多大分子的合成。在糖原的代谢过程中,糖原磷酸化酶(GPase)催化糖原降解,它促使糖原从非还原端依次移去葡萄糖残基。在滞育昆虫中,糖原代谢与温度有关,GPase是糖原合成山梨醇的关键酶。目前在甲壳动物中,有关GPase的报道很少,在中国卤虫的胚胎发育以及温度胁迫方面更是未见报道。因此,本实验深入研究了GPase在卤虫滞育和滞育解除、早期发育和温度胁迫过程中的作用,为进一步研究卤虫滞育过程中的分子机制、进一步开发利用卤虫资源等方面,提供一定的理论参考并具有潜在的应用价值。本研究以RACE技术得到中国卤虫GPase基因全长,利用生物信息学技术对GPase基因进行分析,并采用原位杂交技术观察GPase基因在中国卤虫胚胎发育时期的表达部位,以实时荧光定量PCR技术研究GPase在中国卤虫胚胎发育不同时期以及温度胁迫实验中的表达量。实验结果显示,GPase基因全长为2790bp,序列包括2562bp的开放阅读框,61bp的5’非编码区和167bp的3’非编码区。经过生物信息学分析,预测该GPase蛋白含有853个氨基酸,分子量为98.19kD,理论等电点5.67,包含phosphorylase结构域,属于GTB型糖基转移酶超家族。经过序列比对和构建进化树分析,GPase在进化过程中比较保守。通过原位杂交实验证明,在不同发育时期,实验组均发现杂交阳性信号,并且表达部位具有广泛性。通过荧光实时定量PCR的实验可以观察到,GPase在不同发育时期,均有表达,但相对表达量有显著变化。GPase在0h和5h具有很高的表达量,随后显著下调,并且维持在一个很低的水平,直到第3d才开始有小幅度的上升趋势。在温度胁迫条件下,GPase的表达量首先伴随着温度的下降而下降,之后从15℃开始,伴随着温度的下降而表现上升趋势。这些结果说明,GPase不仅在卤虫胚胎发育过程中起重要作用,并且是一种温度相关基因,可能参与抗寒能力的调节。