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[目的]观察proNGF、p75和Sortilin在人胚胎脊髓发育不同时期的表达变化,从而探讨其与人胚胎脊髓发育的关系。[方法]应用免疫组织化学(immunohistochemistry, ICH)及逆转录聚合酶链式反应(Reverted Transciption Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)技术检测proNGF及其受体p75和Sortilin在人胚胎3M-7M脊髓内的表达及变化情况。[结果]1、proNGF蛋白在3M-7M发育过程的人胚胎脊髓中均有表达。低倍镜下,可见脊髓灰质背角大部分、白质背侧部分和后正中裂两侧等感觉功能相关的区域阳性染色,脊髓腹角运动神经元核团阳性染色。中央管阴性染色。脊髓其余部位均阴性染色。脊髓灰质位于中央管背内侧的Clarke背核着色清晰。脊髓proNGF染色3M到5M逐渐增强,5M到7M逐渐减弱(图4:A1,B1,C1,D1,E1)。高倍镜下,脊髓灰质背侧阳性染色神经纤维成丝状,相互交织。脊髓灰质背侧部分5M组阳性染色最明显,且强阳性染色部位随着脊髓发育而不同,3M时为整片,5M时为内外侧两部分,7M时为灰质背侧边缘与白质交界处。灰质腹侧阳性染色神经元核团内可见散在神经细胞,胞浆着色,成不规则形。灰质腹侧神经纤维染色不及灰质背侧明显。高倍镜下,白质中神经纤维染色成丝状,相互交织,阳性染色神经细胞夹杂其间。3M-7M阳性染色部位有由外向里延伸的趋势(图4)。RT-PCR结果显示:proNGF组mRNA表达4M、5M、6M组较3M、7M组有显著增加(P<0.05),而4M、5M、6M组之间及3M、7M组之间比较无统计学意义。2、p75蛋白在3M-7M发育过程的人胚胎脊髓中均有表达,其表达模式与proNGF表达相似。低倍镜下,可见脊髓灰质背角大部分、白质背侧部分和后正中裂两侧等感觉功能相关的区域阳性染色,脊髓腹角运动神经元核团阳性染色。中央管阴性染色。脊髓其余部位均阴性染色。脊髓灰质位于中央管背内侧的Clarke背核弱染色。脊髓p75染色五组中3M最弱(图5:A1,B1,C1,D1,E1)。高倍镜下,脊髓灰质背侧阳性染色神经纤维成丝状,相互交织。脊髓灰质背侧部分5M组阳性染色最明显,且在脊髓灰质背侧强阳性染色区域随着发育而不同,开始整片,再分为内外侧两部分,7M时位于灰质背侧边缘与白质交界处。灰质腹侧阳性染色神经元核团内可见散在神经细胞,成不规则形,胞浆染色。灰质腹侧神经纤维染色不及灰质背侧明显。高倍镜下,白质中神经纤维染色成丝状,相互交织。阳性染色神经细胞夹杂其间。3M-7M阳性染色部位有由外向里延伸的趋势(图5)。RT-PCR结果显示:p75组mRNA表达3M到5M逐渐增加,而5M到7M逐渐减少,5M为峰值,与3M、6M、7M比较均显著增加(P<0.05)。3、Sortilin蛋白在3M-7M发育过程的人胚胎脊髓各个部位均有表达。脊髓灰质中背角、侧角、前后联合都可见阳性染色,腹角可见阳性染色神经元散在分布。脊髓白质普遍阳性染色,前正中沟、后正中裂均见阳性染色,且相比于灰质染色较深,与灰质形成清晰界线。脊髓sortilin染色5M和7M比3M、4M和6M深(图6:A1,B1,C1,D1,E1)。高倍镜下,脊髓灰质可见阳性染色的丝状神经纤维、三角形、圆形等各种形状的阳性染色神经细胞和圆点状神经胶质细胞,神经细胞和神经胶质细胞胞浆着色。脊髓白质中丝状神经纤维相互交织构成网状,其间夹杂着大量的各种形状的神经细胞及圆点样神经胶质细胞(图6)。RT-PCR结果显示:sortilin组mRNA表达4M、5M、6M组较3M、7M组有显著增加(P<0.05),而4M、5M、6M组之间及3M、7M组之间比较无统计学意义。[结论]1.在人胚胎发育过程中3M-7M的脊髓,proNGF、p75和sortilin都有表达。proNGF和p75表达于脊髓灰质背角和白质背侧等与感觉功能相关的部位,也表达脊髓灰质腹角的运动神经细胞中。sortilin在脊髓灰质和白质神经细胞和神经纤维中广泛表达。提示其在人胚胎脊髓的感觉功能和运动功能发育中发挥着作用。2.在3M-7M的人胚胎脊髓发育中,proNGF和p75在不同时间组的脊髓感觉功能相关部位的差异表达,提示其与脊髓感觉功能发育密切相关。鉴于proNGF/p75/sortilin复合体在介导凋亡中的作用,提示其在人胚胎脊髓发育过程中影响感觉神经的凋亡,在感觉神经的发育中发挥着重要作用。3. proNGF、p75和sortilin的mRNA表达在人胚胎脊髓3M-7M都存在着先升高再降低的趋势,提示proNGF/p75/sortilin复合体介导的凋亡在人胚胎脊髓3M-7M先增加后降低。